[發明專利]一種幼烏賊的標記方法、試劑和應用

無效

• 申請號: 201410145500.4
• 申請日: 2014-04-11
• 公開（公告）號: CN103897422A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 梁君;畢遠新;王偉定
• 申請（專利權）人: 浙江省海洋水產研究所
• 主分類號: C09B1/515
• 分類號: C09B1/515;A01K61/00
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227
• 代理人: 吳瑾瑜

技術領域

本發明涉及水生動物領域，尤其是水生動物標記方法，具體為幼烏賊染色標記方法、試劑和應用。

背景技術

標志放流是研究水生生物分布規律、估算自然種群數量和評估人工增殖放流效果的重要手段之一。國內外常見的標志方法有掛牌標志、切鰭、熒光標記、金屬線碼標記、分離式衛星標志和生物標志等內外部標志法，實踐表明，應用普遍且更容易回收的反而是最為傳統的掛牌標志法。因此，有必要開展新型標志方法的探索，特別是有特點的游泳生物品種，以建立高效的標志方法，可為更加準確地評價增殖放流的效果提供技術保障。

烏賊同一般貝類的區別在于，一般貝類貝殼都是長在軀體的外部形成外骨骼，而烏賊的貝殼卻在長期進化中演變成了內貝殼，形成了內骨骼。烏賊的內骨骼位于體背側皮膚下的殼囊內，很發達，呈長橢圓形前端圓，末端有一尖形突起。內骨骼為石灰質，背側硬，腹側疏松，空隙多。內骨骼不但可以增加身體的堅強性，又可使身體比重減小，有利于游泳，并有助于保持平衡。

專利200610070448.6公開了一種標志金烏賊的方法，將孵化后的金烏賊置于含有60～80ppm染色劑的海水中，浸泡染色20～28小時，所用染料為茜素絡合物指示劑。金烏賊是一種有針類烏賊，其內殼上帶有骨針，該方法將通過有染色劑浸泡，使金烏賊內殼骨針部出現肉眼可見的半橢圓形淺紫色圓圈；在熒光顯微鏡下觀察，為亮紅色。但這種方法并不適用于無針類的烏賊。

所使用的茜素絡合物指示劑為3-氨基甲基茜素-N,N-乙酸（3-[N,N-Bis(carboxymethyl)aminomethyl]-1,2-dihyox-yanthraquinone，又稱Alizarin?Complexone，ALC），微溶于水、乙醇和乙醚，堿性條件下溶解于水，可用于比色法檢測離子。分子式為C19H15NO8，結構如式（I）。

ALC的水溶液在pH值小于6時呈黃色，在6與10之間呈紅色，大于11時呈藍紫色。

發明內容

本發明的目的在于將茜素絡合物3-氨基甲基茜素-N,N-乙酸用于標記幼烏賊，提供一種幼烏賊內殼染色的標記方法。

技術方案為，將茜素絡合物3-氨基甲基茜素-N,N-乙酸用于標記幼烏賊；茜素絡合物3-氨基甲基茜素-N,N-乙酸可用于制備標記幼烏賊的試劑。

所述的試劑為注射劑，是3-氨基甲基茜素-N,N-乙酸水溶液，pH值為6～10，更優選7～9；其中3-氨基甲基茜素-N,N-乙酸的濃度為250～500ppm，優選為300～400ppm。

標記幼烏賊的方法為，將上述注射劑從以下兩個位置中的至少一個注射入幼烏賊的內骨骼，每一個位置的注射量為0.6～0.8ml：

（1）幼烏賊內骨骼的末端，

（2）幼烏賊內骨骼側邊的中心位置。

從內骨骼的末端注射時，針頭沿著與內骨骼平行的方向，旋轉刺入0.8～1.2cm，然后向外拔出0.2～0.5cm，再將注射劑推注入內骨骼；從內骨骼側邊的中心位置注射時，針頭沿著與內骨骼平行的方向，旋轉刺入0.5～0.8cm，然后向外拔出0.2～0.3cm，再將注射劑推注入內骨骼。針頭直徑為0.3～0.35mm。

上述幼烏賊的胴長為20～50mm，；優選的，胴長為20～40mm。優選的，幼烏賊為曼氏無針烏賊。

本發明利用3-氨基甲基茜素-N,N-乙酸染色液在幼烏賊內殼鈣化層的沉積作用，解決了幼烏賊的染色操作問題。染色標記的效果好、操作方便、標志材料浪費少；幼烏賊死亡率低。并且標志色能夠長久保持，肉眼可識別。該染色標志法和試劑兼具體外標志和體內標志的雙重效果。由于烏賊表皮薄而透明，在標志放流后，無需解剖或借助其它儀器設備能在自然海區快速分辨并回捕經染色的標志個體。

附圖說明

圖1為實施例1中，注射幼烏賊的位置。圖（a）和圖（b）分別為從幼烏賊末端和側端的中心位置注射標記的示意圖。

具體實施方式

實施例1

所使用的ALC試劑購自日本株式會社同仁化學研究所。

（1）染色母液的配制：

將100mg茜素絡合指示劑ALC粉末與少量蒸餾水混合，用濃度為0.1mol/L的NaOH溶液作為pH調節劑，定容至50ml，制成濃度為2.0g/L的染色母液備用，染色母液的pH值為8；

（2）標記注射針劑的制備：將上述母液用蒸餾水稀釋為350mg/L的注射液，注射液的pH值為7～8。

操作方法：