[發明專利]一種豬圓環病毒2型純化方法

有效

• 申請號: 201410145472.6
• 申請日: 2014-04-11
• 公開（公告）號: CN103937756B
• 公開（公告）日: 2017-01-04
• 發明（設計）人: 梁武;付旭彬;米娜;丁旭娜;呂茂杰;楊保收;李守軍
• 申請（專利權）人: 天津瑞普生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12N7/02
• 分類號: C12N7/02;A61K39/12;A61P31/20
• 代理公司: 天津濱海科緯知識產權代理有限公司12211
• 代理人: 韓敏

1.一種豬圓環病毒2型純化方法，其特征在于使用微濾澄清純化系統和超濾濃縮純化系統，并包括以下步驟：

1）將無菌吐溫20按0.5%～10%(v/v)的比例加入豬圓環病毒2型病毒液中，振蕩處理；

2）將步驟1）振蕩處理后的病毒液注入微濾澄清純化系統的進料罐中，開啟循環泵，循環一定時間后經0.45或0.65μm中空纖維微濾柱微濾，收集透過液待用；

3）以1:1(v/v)的比例將無菌的0.1M?PBS緩沖液加入進料罐中的截留液中，重懸，開啟循環泵循環一定時間，收集透過液，得到第一洗濾液待用；

4）以1:1(v/v)的比例將無菌的0.1M?PBS緩沖液加入到步驟3）處理完畢的進料罐中的截留液中，重懸，開啟循環泵循環一定時間，收集透過液，得到第二洗濾液待用；

5）以1:1(v/v)的比例將無菌的0.1M?PBS緩沖液加入到步驟4）處理完畢的進料罐中的截留液中，重懸，開啟循環泵循環一定時間，收集透過液，得到第三洗濾液待用；

6）將上述透過液、第一洗濾液、第二洗濾液、第三洗濾液混合均勻，得到混合液；

7）將步驟6）得到的混合液注入超濾濃縮純化系統的進料罐，開啟循環泵循環一定時間，經100KD或300KD中空纖維超濾柱進行超濾處理，棄去透過液，收集進料罐中剩余截留液，即為初級濃縮病毒液；

8）以1:1(v/v)的比例將0.1M?PBS注入進料罐中的初級濃縮病毒液中，重懸，開啟循環泵循環一定時間，棄去透過液，收集進料罐中剩余截留液，即為二級濃縮病毒液；

9）以1:1(v/v)的比例將0.1M?PBS注入進料罐中的二級濃縮病毒液中，重懸，開啟循環泵，循環一定時間，棄去洗濾液，收集進料罐中剩余截留液，即為三級濃縮病毒液；

10）以1:1(v/v)的比例將0.1M?PBS注入進料罐中的三級濃縮病毒液中，重懸，開啟循環泵，循環一定時間，棄去洗濾液，收集進料罐中剩余截留液，即為病毒濃縮液成品。

2.根據權利要求1所述的一種豬圓環病毒2型純化方法，其特征在于步驟1）所述的振蕩處理時間為10min。

3.根據權利要求1所述的一種豬圓環病毒2型純化方法，其特征在于步驟1）所述的比例為5%。

4.根據權利要求1所述的一種豬圓環病毒2型純化方法，其特征在于步驟2）所述的微濾的濾膜孔徑為0.45或0.65μm，較優的為0.65μm。

5.根據權利要求1所述的一種豬圓環病毒2型純化方法，其特征在于步驟7）所述的超濾濾膜孔徑為300KD。

6.根據權利要求1所述的一種豬圓環病毒2型純化方法，其特征在于步驟2、3、4、5、7、8、9、10中所述的開啟循環泵循環一定時間的操作條件均為400rpm循環30min。

7.根據權利要求1～6所述的一種豬圓環病毒2型純化方法，其特征在于利用該方法制備的病毒濃縮液成品用于制備疫苗。