[發(fā)明專(zhuān)利]一種小葉矮生型廣玉蘭的嫩莖段離體培養(yǎng)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410143713.3
• 申請(qǐng)日: 2014-04-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103988777B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-06-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陸錦明;朱天華;湯桂鈞
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海閔行區(qū)苗圃
• 主分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 上海精晟知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司31253
• 代理人: 胡志強(qiáng)

1.一種小葉矮生型廣玉蘭的嫩莖段離體培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下歩驟：

1)、擬接種材料的選擇與預(yù)處理：選取當(dāng)年萌發(fā)的半木質(zhì)化新枝，剪去已展平的葉片，用洗衣粉沖洗三遍，置于自來(lái)水龍頭下沖洗3h；

2)、外植體的消毒:在超凈臺(tái)上，先用75％(vol)乙醇溶液消毒1～2min，然后用0.2％(vol)的新潔爾敏溶液消毒15min，最后用10％(vol)次氯酸鈉溶液消毒15～20min，用無(wú)菌水沖洗三遍后無(wú)菌濾紙吸干水份；

3)、無(wú)菌系的建立：在超凈臺(tái)上將嫩枝切成1.3～2.0cm長(zhǎng)的莖段，每個(gè)莖段帶1～2個(gè)莖節(jié)，切除切口處因消毒而壞死的組織，將外植體培養(yǎng)于第一培養(yǎng)基進(jìn)行新芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)，培育成無(wú)菌系；用于建立無(wú)菌系的第一培養(yǎng)基的配方為：MS+0.5～1mg/L ZT+1.0～2.0mg/L BA+0.05～0.1mg/L NAA+蔗糖30g/L+瓊脂粉5.5～6.5g/L，pH值為5.6～5.8；

4)、叢生芽的誘導(dǎo)及增殖：待莖段新芽伸長(zhǎng)至1cm以上時(shí)，將新芽切下接種至第二培養(yǎng)基上誘導(dǎo)叢生芽，并在該培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽的增殖；第二培養(yǎng)基的配方為：MS+2～3mg/L KT+0.2～0.3mg/L NAA+蔗糖30g/L+瓊脂粉5.5～6.5g/L，pH值為5.6～5.8；

5)、將叢生芽在靠近試管苗最下面的葉片著生處下面0.3～0.4mm處切成單芽，切口為每個(gè)單芽最下面的葉片著生處下面0.3mm～0.4mm處，并將單芽接種于第三培養(yǎng)基進(jìn)行壯苗生根培養(yǎng)；用于試管苗壯苗與生根的第三培養(yǎng)基的配方為：1/2MS+0.5～1.0mg/L IBA+0.5～1g/L AC+蔗糖20g/L+瓊脂粉5.5～6.5g/L，pH值為5.6～5.8；

6)、試管苗的煉苗與移栽：將生根的試管苗移栽至泥炭和珍珠巖混合的基質(zhì)中，澆足水后用塑料薄膜覆蓋保溫保濕防失水萎蔫，7天后揭開(kāi)薄膜煉苗，每天葉面噴水3～5次，15～20天后施肥料液；30～35天后移栽至灌滿純泥炭的塑料穴盤(pán)中，經(jīng)3～4個(gè)月培養(yǎng)后直接移栽至土壤或大的容器中。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小葉矮生型廣玉蘭的嫩莖段離體培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟3)中無(wú)菌系的建立、所述步驟4)中叢生芽的誘導(dǎo)與增殖、以及所述步驟5)中壯苗與生根培養(yǎng)，均在如下條件下進(jìn)行：溫度24～26℃、光照強(qiáng)度3000LX，光照時(shí)間為10～12h/d。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小葉矮生型廣玉蘭的嫩莖段離體培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的步驟6)的基質(zhì)中泥炭和珍珠巖的重量比為4:1～3：1。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小葉矮生型廣玉蘭的嫩莖段離體培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟6)的肥料液中含有0.1～0.2wt％硝酸銨、0.1～0.2wt％磷酸二氫鉀、0.1～0.2wt％硫酸鎂。