[發明專利]小麥穗長主效QTL緊密連鎖的分子標記檢測引物與應用

無效

• 申請號: 201410143497.2
• 申請日: 2014-04-10
• 公開（公告）號: CN103882143A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 田紀春;鄧志英;崔勇;李繼發
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 朱家富

技術領域

本發明公開了一種小麥穗長主效QTL緊密連鎖的分子標記檢測引物與應用，涉及小麥分子生物技術與分子標記輔助育種應用技術領域。

背景技術

小麥是世界上重要的糧食作物之一，其產量的高低影響國民經濟的發展和穩定，因此，持續不斷的提高小麥產量一直是小麥重要的研究方向。影響產量性狀的因素較多，除了產量三要素外，穗長也是麥類作物產量的重要因素之一，也是育種目標的重要性狀之一。傳統的育種方法在對產量相關性狀的選擇上具有周期時間長、耗費大、成本高、成果小的缺點，而隨著分子標記和生物技術的發展，分子標記輔助選擇育種成為可能，利用與性狀緊密連鎖的分子標記在不同世代、不受環境和發育時期均可檢測，而且選擇效果較好。已有研究表明穗長不僅與產量息息相關，具有較高的遺傳力，且屬于數量性狀。因此，穗長性狀一直被作為研究的重點。

許多學者對穗長進行了遺傳定位，發現控制穗長性狀的QTL在小麥染色體組中廣泛存在，且牽涉的染色體較多；其中利用單體分析分子發現六倍體小麥4A、5A、6A、7A、1B、3B、4B、5B、6B、7D染色體明顯影響穗長；1B、2D、5A、7A、3D和6D染色體具有增長穗長的功效；在巨穗小麥中3A、5A、2B、1D、6D染色體上有控制穗長的基因，其中2B染色體功效較大。QTL定位研究發現，在普通六倍體小麥中1A、1B、4A、7A染色體上檢測到影響穗長的主效基因。

但是目前關于穗長可用于實際分子育種的緊密連鎖的分子標記卻很少。因此，研究有關穗長的QTL/基因，利用分子標記技術，提高穗長，進而提高穗粒數，最終提高產量獲得高產小麥新品種，在實際育種工作中具有重要的意義。

發明內容

本發明針對現有技術的不足，提供一種小麥穗長主效QTL緊密連鎖的分子標記檢測引物與應用。

本發明技術方案如下：

一種小麥穗長主效QTL緊密連鎖的分子標記的檢測引物，包括分子標記XWMC112的上游引物，核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，分子標記XWMC112的下游引物，核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示；分子標記XCFD53的上游引物，核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示，分子標記XCFD53的下游引物，核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4所示。

一種小麥穗長主效QTL緊密連鎖的分子標記的檢測引物在檢測小麥穗長短中的應用，步驟如下：

以待測小麥的基因組DNA為模板，分別用分子標記XWMC112和分子標記XCFD53的檢測引物進行PCR擴增，經聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，如果分別得到大小為233bp和245bp的PCR擴增產物條帶，則所述待測小麥為長穗小麥。

根據本發明優選的，所述待測小麥的基因組DNA采用如下方法提取：

①取3～4片小麥嫩葉，置于離心管中，放入盛有液氮的容器內，冷凍后研磨5～15min；

②加入900μL65℃預熱的DNA提取工作液，65℃水浴1h，水浴過程中輕搖3～5次，充分混勻；

③室溫冷卻5min后加入等體積的酚:氯仿:異戊醇（體積比25:24:1）充分混勻30min，10000g離心20min；取上清液移入新離心管中，加入等體積的氯仿:異戊醇（體積比24:1），輕輕混勻后10000g離心20min；

④取上清液移入新離心管中，加入等體積的預冷的異丙醇，輕輕混勻，10000g離心30min；

⑤棄去上清液，用70%（體積百分比）的乙醇洗滌DNA沉淀2～3次；

⑥將DNA沉淀晾干，用100μL1×TE溶液溶解，制得待測小麥的基因組DNA；

取1μL提取純化后的的基因組總DNA，用0.8wt％瓊脂糖（含EB終濃度0.5μg/ml）進行電泳，檢測其濃度及純度。電泳儀為北京市六一儀器廠生產的DYY-8型，電泳槽為DYC-33B型。凝膠成像儀上觀察并照相，以檢測小麥基因組DNA的純度及有無降解情況。

每120mL的DNA提取工作液按如下步驟進行配制：提取緩沖液母液（Extraction?Buffer?Stock）50mL、裂解緩沖液母液（Lysis?Buffer?Stock）50mL、十二烷基肌氨酸鈉母液（Sarcosyl?Stock）20mL、焦亞硫酸鈉（Sodium?disulfite）0.6g、聚乙烯吡咯烷酮PVP-40(K29-32)2.4g，混合均勻制得。