[發明專利]一種用于檢測17β-雌二醇的光電適配體傳感器的制備方法

有效

• 申請號: 201410143464.8
• 申請日: 2014-04-11
• 公開（公告）號: CN103940867A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 趙國華;范麗芳;史慧杰;劉梅川
• 申請（專利權）人: 同濟大學
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 張磊

1.一種用于檢測17β-雌二醇的光電適配體傳感器的制備方法，其特征在于所述光電適配體傳感器以硒化鎘納米粒子（CdSe?NPs）修飾二氧化鈦納米管（TiO_2??NTs）為基體電極，在二氧化鈦納米管內外修飾具有專一性識別能力的17β-雌二醇適配體作為探針，并與光電分析技術結合構筑了一種簡單、快速的光電適配體傳感器，所述光電適配體傳感器可實現高靈敏度和高選擇性檢測17β-雌二醇；具體步驟如下：?

（1）鈦板依次用不同細度的磨砂紙機械打磨，接著將其放入二次蒸餾水和乙醇溶液中分別進行超聲清洗5～10?min；然后將所得鈦板用18%的HCl刻蝕10?min；之后將其放在兩電極體系中進行陽極化，鉑片作陰極，鈦板作陽極，兩電極間間距為1?cm,?外加槽電壓為40?V，在25℃溫度時，陽極化2～3?h；電解液采用0.3?wt%?NH₄F和3.0?Vol%?H₂O?的乙二醇溶液；陽極化后的TiO_2?NTs?用二次蒸餾水沖洗并在氮氣氣氛中吹干；之后將其置于管式爐中在氧氣氣氛下500?℃燒結，得到晶形化的TiO_2?NTs；

（2）將步驟(1)制備得到的TiO_2?NTs放入三電極體系，TiO₂?NTs為工作電極，鉑電極為輔助電極，飽和甘汞電極為參比電極，電解液為0.1?mol/L硫酸鎘，0.1?mol/L無水硫酸鈉和1.0?mmol/L二氧化硒，在-0.7?V的恒電壓下，沉積1～2?h；將CdSe?NPs均勻的沉積在TiO_2?NTs的管內外，得到CdSe?NPs-TiO_2?NTs電極，并將CdSe?NPs-TiO_2?NTs電極在氮氣氣氛中，300?℃下燒結；

（3）將步驟(2)得到的CdSe?NPs-TiO₂?NTs電極留有1cm×1cm大小的電極面積，將1?%乙酸的殼聚糖溶液滴在1?cm²?的CdSe?NPs-TiO_2?NTs電極上，在40?℃恒溫下干燥；之后用0.1?mol/L?NaOH?和去離子水沖洗數次，并干燥；然后將5?%的戊二醛溶液滴在CdSe?NPs-TiO_2?NTs電極表面，室溫下，反應30?min，用去離子水沖洗并干燥；

（4）取末端氨基修飾的17β-雌二醇適配體，滴于步驟(3)所得附有殼聚糖和戊二醛的NPs-TiO_2?NTs電極表面，在4?℃下反應12?～18?h；并沖洗以去除物理吸附的適配體，然后用牛血清蛋白堵塞未鍵合的戊二醛活性位點，以避免非特性吸附，得到17β-雌二醇適配體修飾的CdSe?NPs-TiO_2?NTs的傳感器，不用時，將其置于0.1?mol/L?PBS（pH?7.41）的緩沖溶液。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于步驟（1）中二氧化鈦納米管燒結時的升溫和冷卻速率為2?℃/min，步驟（2）中CdSe?NPs-TiO_2?NTs電極燒結時的升溫和冷卻速率為2?℃/min。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于步驟（4）中所用的牛血清蛋白的濃度為3%（w/v）。