[發(fā)明專利]成團(tuán)泛菌新菌株XM2及其菌懸液的制備方法和對梨黑斑病的防治方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410143195.5
• 申請日: 2014-04-11
• 公開（公告）號: CN103952338A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張曉宇;張姝;王春生;張澤宇;張則君;韓巨才;劉慧平;張永杰
• 申請（專利權(quán)）人: 山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品貯藏保鮮研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/00;A01P3/00;C12R1/01
• 代理公司: 太原華弈知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 14108
• 代理人: 李毅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，具體地說是涉及一種成團(tuán)泛菌（Pantoea?agglomeran）新菌株XM2及其對梨黑斑病的防治方法。

背景技術(shù)

梨黑斑病是一種危害嚴(yán)重的世界性氣傳真菌病害，由鏈格孢（Alternaria?alternata）引起，在梨果采前和采后均有發(fā)生。我國是梨種植和出口大國，采后病原微生物的侵染造成采后腐爛損失嚴(yán)重，直接影響梨果貯運(yùn)生產(chǎn)，梨黑斑病的有效防治成為梨產(chǎn)業(yè)中急待解決的問題。使用化學(xué)殺菌劑控制水果的采后病害一直被認(rèn)為是最有效的控制方法。然而，隨著病原菌抗藥性的逐漸增加，及人們對水果質(zhì)量要求的提高和環(huán)保意識的加強(qiáng)，果蔬采后生物防治方法作為一種控制采后病害的新途徑，逐漸為人們所認(rèn)可，并成為研究熱點(diǎn)。近年有不少關(guān)于梨黑斑病生物防治的研究報道。齊東梅等篩選了一株枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）H110，其發(fā)酵液對梨采后黑斑病的防治率達(dá)到86.6%。謝莉從土壤中分離到金色鏈霉菌（Streptomyces?aureus）B-105，其發(fā)酵液對梨黑斑病的抑制率67.4%。Benbow等研究了隱球酵母屬的Cryptococcus?informominiatus和紅酵母屬的Rhodotorula?glutinis對梨病害的抑菌效果，Cryptococcus?informominiatus和?Rhodotorula?glutinis在采收前1?d對梨進(jìn)行處理，能有效地控制梨的采后黑斑病。宋聰?shù)确蛛x到一株枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）J18，梨果在菌懸液中浸果30?s，晾干后噴施接種鏈格孢菌，梨黑斑病的發(fā)病率僅為16.57%，且菌株能在梨果上很好地定殖。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一株成團(tuán)泛菌（Pantoea?agglomeran）新菌株XM2及其對梨黑斑病的防治方法。

本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。

一株成團(tuán)泛菌（Pantoea?agglomeran）新菌株XM2，于2014年2月17日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC?No.8822?，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所。

所述的成團(tuán)泛菌（Pantoea?agglomeran）新菌株XM2是從山西省太原市金灘村西梅果實(shí)表面分離并純化得到。在溶菌肉湯（LB）培養(yǎng)基培養(yǎng)48?h~72?h。成團(tuán)泛菌（Pantoea?agglomeran）新菌株XM2呈革蘭氏陰性菌，短桿狀，大小為(?0.5?~?0.9)?μm×(?1.0?~?2.5)?μm，有鞭毛，具有運(yùn)動性（見圖1）。在LB培養(yǎng)基平板上好氧培養(yǎng)24?h?~?48?h后，產(chǎn)生表面光滑、凸起、半透明、邊緣整齊、直徑為2.0?mm?~?3.0?mm的黃色菌落。菌株XM2為兼性厭氧菌，生長pH范圍為5.7?~?7.5，生長溫度范圍為4℃?~?40℃，NaCl濃度范圍?0%?~?7%。其它生理生化指標(biāo)如表1所示：

表1?菌株XM2生理生化特征

經(jīng)16S?rDNA序列測定：PCR擴(kuò)增得到菌株XM2的16S?rDNA片段，測序長度為1386?bp，在GenBank中的序列登錄號為KF150143。將16S?rDNA序列與GenBank數(shù)據(jù)庫中的序列進(jìn)行BLAST比對，結(jié)果表明，菌株XM2與泛菌屬Pantoea中的成團(tuán)泛菌（P.?agglomerans）的同源性達(dá)到99.8%?，結(jié)合形態(tài)特征和生理生化指標(biāo)，確定菌株XM2為成團(tuán)泛菌（P.?agglomerans）。

所述的溶菌肉湯（LB）培養(yǎng)基由以下質(zhì)量/體積份的原料組成：酵母粉5，蛋白胨10?，NaCl?5?，瓊脂粉18?，蒸餾水1000；pH?7.4-7.6。成團(tuán)泛菌新菌株XM2菌懸液的制備方法，包括如下步驟：

(1)?種子液制備?從試管斜面上用接種針挑取一環(huán)新鮮成團(tuán)泛菌XM2單菌落，接種于LB培養(yǎng)液中，28℃、160?rpm/min震蕩恒溫培養(yǎng)24?h，制得成團(tuán)泛菌XM2的種子液；

(2)?發(fā)酵液制備?將成團(tuán)泛菌XM2的種子液按照1%的比例接入LB培養(yǎng)液中，28℃?160?rpm/min震蕩恒溫培養(yǎng)72?h，制得成團(tuán)泛菌XM2的發(fā)酵液；