[發明專利]一種基于微小RNA let-7a診斷子宮內膜腺癌的方法

在審

• 申請號: 201410140271.7
• 申請日: 2014-04-09
• 公開（公告）號: CN104975074A
• 公開（公告）日: 2015-10-14
• 發明（設計）人: 馬成斌
• 申請（專利權）人: 上海市長寧區婦幼保健院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 沈陽晨創科技專利代理有限責任公司 21001
• 代理人: 張晨

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，具體涉及一種基于微小RNA?let-7a診斷子宮內膜腺癌的方法。?

背景技術

子宮內膜腺癌(endometrial?carcinoma,EC)是常見的女性生殖道惡性腫瘤之一，約占女性癌瘤的7%，占女性生殖道惡性腫瘤的20-30%。近年來發病率呈逐年上升趨勢，是威脅絕經后婦女健康的主要腫瘤之一。目前研究發現子宮內膜腺癌有兩種類型，一種為雌激素依賴型（I型子宮內膜腺癌），一種為非雌激素依賴型（II型子宮內膜腺癌），兩型的高危因素不同。前者的發生與雌激素長期刺激有關，多發生在內膜增生的基礎上，病理類型以腺癌為主，分化好，肌層浸潤淺，預后較好。后者與雌激素的刺激關系不大，多發生在萎縮內膜基礎上，病理類型以漿液性乳頭狀腺癌多見，分化差，容易有深肌層浸潤，預后不良。雖然I型子宮內膜腺癌常見且研究較多，但雌激素增高造成子宮內膜增生乃至癌變的具體機制仍然不明確。?

人類疾病往往是由于一些基因表達紊亂或失控所引起的。小RNA(microRNA,miRNA)是一類小分子非編碼RNA，通過核酸序列互補性結合到特定的靶mRNA上來調節翻譯或降解靶mRNA，是一種起負調控作用的分子。人類基因組中已確認的miRNA有幾百個，可能參與30%人類基因組遺傳信息的表達調控。miRNA作為新發現的參與高等生物基因表達調控的明星分子，在細胞增殖、分化、發育生物學和一些疾病如癌癥、艾滋?病等方面都起到重要作用。Calin等人研究發現患有一種成年型B細胞慢性淋巴型白血病（CLL）常有miR-15a和miR-16-1基因簇的缺失或是表達下調。但目前少有關于miRNA與子宮內膜腺癌相關性的報道。研究miRNA基因的表達譜，尋找與子宮內膜腺癌相關的miRNA基因，并對其功能進行研究，有可能發現新的子宮內膜腺癌易感基因和新的藥物靶點，有助于更好地理解子宮內膜腺癌的發病機制。?

let-7a是一類高度保守的miRNA分子，最初是在線蟲的研究中被發現。鑒于miRNA在生命體中的廣泛作用，我們認為一些參與子宮內膜腺癌重要生理或病理過程的關鍵基因會受到某些miRNA的調控。為了研究miRNA在子宮內膜腺癌中的作用，我們利用基因芯片(microarrays)法研究了子宮內膜腺癌病人組織中miRNA的表達譜變化。基因芯片法能夠靈敏、快速對人類體內成熟的miRNA的表達進行大規模的檢測和定量。與傳統的Northern雜交，以及核糖核酸酶保護法(ribonuclease?protection?assays)相比，基因芯片法不需要接觸放射性同位素，且所需要的樣品量相對較少，檢測范圍廣。我們應用這一分析手段研究了2個子宮內膜腺癌病人的腫瘤組織和周圍正常組織中的miRNA的表達譜特征。研究結果顯示，17個miRNAs在子宮內膜腺癌病人中的表達水平明顯低于正常人，而另外15個miRNA表達顯著上調。值得注意的是，let-7a在內膜腺癌腫瘤組織中的表達下調最為明顯，約4～5倍。相關的研究表明，let-7a屬于抑癌基因一族。在腦膠質瘤細胞株U87中過量表達let-7a，抑制細胞的體外增殖和轉移，和降低裸鼠體內所成腫瘤的大小。另外，肝癌細胞的研究顯示，let-7a參與促進腫瘤細胞的凋亡，因此可以增強藥物sorafenib(誘導腫瘤細胞凋亡)的治療效果。此外，人為?降低let-7a的表達顯著增強非小細胞肺癌細胞的體內成瘤能力，重要的是以let-7a喂食荷瘤小鼠，顯著抑制腫瘤的生長。結合其它研究報道，表明let-7a作為腫瘤抑制基因的功能和相關分子機制的研究已越來越受到關注，相關的研究結果也指出miRNA的替代療法有望成為新的腫瘤治療方法。盡管已取得的一些進展，但是let-7a如何影響子宮內膜腺癌的發生發展至今未見相關報道。?