[發(fā)明專利]一種人體腸道微生態(tài)系統(tǒng)的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410139415.7
• 申請(qǐng)日: 2014-04-09
• 公開（公告）號(hào): CN104107194A
• 公開（公告）日: 2014-10-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳廷濤;辛洪波;王鑫
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南昌大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K35/66
• 分類號(hào): A61K35/66;A61P31/00
• 代理公司: 南昌市平凡知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 36122
• 代理人: 夏材祥

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種人體腸道微生態(tài)系統(tǒng)的制備方法。

背景技術(shù)

????在家畜養(yǎng)殖過程中，大量抗生素的濫用導(dǎo)致其殘留進(jìn)入食品供應(yīng)渠道，最終進(jìn)入人體并引起傳染性疾病。目前，中國(guó)、歐洲、澳大利亞和美國(guó)對(duì)抗生素使用的國(guó)標(biāo)明確要求須對(duì)微生物菌群進(jìn)行安全評(píng)價(jià)。但是，濫用抗生素藥物的現(xiàn)象仍然存在。

????恩諾沙星是一種廣譜抗菌藥劑。在中國(guó)，它被允許使用在家畜飼養(yǎng)上，主要通過對(duì)家畜進(jìn)行皮下注射、肌肉注射或者口服等方式使用。而恩諾沙星殘留會(huì)隨著食品供應(yīng)進(jìn)入人體腸道并改變食用者體內(nèi)腸道菌群數(shù)量和多樣性，從而影響人體健康。

????腸道微生物與人類健康密切相關(guān)，許多疾病的發(fā)生往往都伴隨著腸道微生物的失衡，包括菌群的定植位置、數(shù)量和種類的變化。當(dāng)由抗生素引起的胃腸道疾病發(fā)生時(shí)，我們會(huì)發(fā)現(xiàn)人類腸道微生物嚴(yán)重失調(diào)，并伴隨著致病菌的瘋長(zhǎng)和益生菌(lactobacilli,?bacteroides?and?bifidbacteria)的大量減少。同時(shí)，微生物失調(diào)會(huì)導(dǎo)致人體對(duì)營(yíng)養(yǎng)吸收的能力降低、免疫力的下降和微生物對(duì)病原體的抗定植能力的減弱，使疾病惡化。因此，在很長(zhǎng)一段時(shí)間，用包含益生微生物的產(chǎn)品來恢復(fù)腸道健康都是一種極重要的方式，而菌株的選擇主要有lactobacilli和bifidbacteria，它們?cè)絹碓蕉嗟谋挥糜诟纳迫祟惖慕】怠?/p>

????然而，目前幾乎沒有人嘗試將人體腸道微生物菌群作為一個(gè)整體研究其對(duì)外界病原體抵御能力的影響。本發(fā)明中，我們培養(yǎng)了健康人體腸道菌群，將活細(xì)胞計(jì)數(shù)法和DGGE法相結(jié)合，綜合評(píng)價(jià)了恩諾沙星對(duì)腸道菌群多樣性的影響并評(píng)價(jià)了健康人體腸道菌群微生態(tài)系統(tǒng)在預(yù)防感染中的良好效果。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種人體腸道微生態(tài)系統(tǒng)的制備方法。

本發(fā)明是利用健康人體腸道中存在的土著菌群抵抗外來致病菌，將在人體腸道微生物系統(tǒng)中占優(yōu)勢(shì)地位的腸道微生態(tài)主要優(yōu)勢(shì)菌群培養(yǎng)后直接給人或者通過體外模型模擬人體腸道來驗(yàn)證其抵抗機(jī)會(huì)致病菌的效果。

本發(fā)明所述制備方法包括下列步驟：

1、樣品的收集和保存：收集志愿者早晨第1次排便樣品，轉(zhuǎn)人厭氧環(huán)境，加入甘油，其重量為糞便和甘油總重量的10％，旋渦振蕩器混勻，-8O?℃保存；

2、恒化器的組裝和使用：將儲(chǔ)料罐，發(fā)酵罐，廢液罐，橡膠塞，硅膠管，裝NaOH的玻璃瓶及通氣過濾器按順序連接起來，置于工作臺(tái)上，連接混合氣體，蠕動(dòng)泵，pH調(diào)節(jié)器，磁力攪拌器，廢氣排除裝置；

3、恒化器內(nèi)培養(yǎng)基的制備：按加入成分占終產(chǎn)物質(zhì)量百分比加入如下成分：5‰可溶性淀粉，3‰牛乳酪蛋白，3‰蛋白胨，0.6‰果膠，0.6‰木聚糖，0.6‰阿拉伯半乳聚糖，0.6‰支鏈淀粉，0.4‰半胱氨酸,?0.01‰血紅素，0.25‰膽固醇，0.25‰鵝脫氧膽酸，0.25‰膽酸，2‰磷酸二氫鉀，10‰磷酸氫二鉀，4.5‰氯化鈉，0.5‰七水硫酸鎂，0.45‰二水氯化鈣，培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌后用蠕動(dòng)泵泵入儲(chǔ)料罐內(nèi)；

4、腸道微生態(tài)系統(tǒng)的制備：恒化器內(nèi)通氮?dú)獗３謪捬酰慊髦糜?7℃水浴，罐內(nèi)pH在線控制為6.5，運(yùn)行體積500?mL，以35?mL／h稀釋速率利用蠕動(dòng)泵進(jìn)泵出，待恒化器穩(wěn)定后，按重量比接種10%在-8O?℃保存的糞便樣品，連續(xù)培養(yǎng)8-16天后得到的的培養(yǎng)物即為健康人體腸道微生態(tài)系統(tǒng)。

本發(fā)明的有益效果：相較于單一或幾種益生菌組合，本發(fā)明直接將健康志愿者整個(gè)微生態(tài)系統(tǒng)作為一個(gè)整體用于疾病的防治，穩(wěn)定、抗干擾能力強(qiáng)、治愈效果好；此外，由于使用的微生態(tài)系統(tǒng)來源于人體，因此培養(yǎng)后的微生態(tài)系統(tǒng)對(duì)人體安全、無毒副作用。

附圖說明

圖1-1空白組中腸道微生態(tài)系統(tǒng)菌群數(shù)量監(jiān)測(cè)；

圖1-2?1.25μg/mL恩諾沙星對(duì)恒化器中腸道微生態(tài)系統(tǒng)菌群數(shù)量的影響；

圖1-3?12.5μg/mL恩諾沙星對(duì)恒化器中腸道微生態(tài)系統(tǒng)菌群數(shù)量的影響；

圖1-4?125μg/mL恩諾沙星對(duì)恒化器中腸道微生態(tài)系統(tǒng)菌群數(shù)量的影響；

圖1-5?添加腸道微生態(tài)系統(tǒng)后對(duì)125μg/mL恩諾沙星造成腸道菌群數(shù)量紊亂的恢復(fù)效果；

圖2腸道微生態(tài)系統(tǒng)抵抗機(jī)會(huì)致病菌白假絲酵母菌?SC5314效果圖。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：

人體腸道微生態(tài)系統(tǒng)的制備方法