[發(fā)明專利]鑒定脆性組氨酸三聯(lián)體(Fhit)相互作用的方法及其用途

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410137410.0
• 申請(qǐng)日: 2008-10-27
• 公開（公告）號(hào): CN103898069A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: C·M·克羅斯;F·特拉帕索
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 俄亥俄州立大學(xué)研究基金會(huì)
• 主分類號(hào): C12N7/01
• 分類號(hào): C12N7/01;C12N15/861;C12N15/53;C12N15/10;A61K48/00;A61P35/00;C12R1/93
• 代理公司: 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所 11038
• 代理人: 林遠(yuǎn)成

1.一種能夠分離Fhit-His6的腺病毒，該腺病毒包括攜帶FHIT-His6cDNA的腺病毒。

2.一種分離外源過表達(dá)的Fhit-His6的方法，該方法包括使用攜帶FHIT-His6cDNA的腺病毒，其中通過His標(biāo)簽分離所述Fhit-His6。

3.一種重組腺病毒，該重組腺病毒攜帶在其3’用編碼六組氨酸表位標(biāo)簽的序列修飾的脆性組氨酸三聯(lián)體(Fhit)FHIT?cDNA(AdFHIT-His6)。

4.一種在至少一個(gè)細(xì)胞中介導(dǎo)凋亡過程的方法，該方法包括使所述細(xì)胞暴露于足以在所述細(xì)胞中介導(dǎo)所述凋亡過程的量的脆性組氨酸三聯(lián)體(Fhit)基因產(chǎn)物。

5.一種在細(xì)胞中誘導(dǎo)凋亡過程的方法，該方法包括使所述細(xì)胞暴露于足以在所述細(xì)胞中引起活性氧簇(ROS)產(chǎn)生的量的脆性組氨酸三聯(lián)體(Fhit)基因產(chǎn)物。

6.一種在至少一個(gè)細(xì)胞中介導(dǎo)凋亡過程的方法，該方法包括：使所述細(xì)胞暴露于足量的脆性組氨酸三聯(lián)體(Fhit)基因產(chǎn)物，以允許Fhit進(jìn)入所述細(xì)胞中的線粒體，與所述細(xì)胞中的Fdxr蛋白相互作用并引起與ROS產(chǎn)生相關(guān)的Fdxr蛋白水平的增加，從而引起所述細(xì)胞中的凋亡過程的變化。

7.一種制備野生型FDXR(鐵氧還蛋白還原酶)cDNA的方法，該方法包括：使用引物序列5’-CTgTTCCCAgCCATggCTTCgCgCTg-3’(正向)[SEQ?ID?NO:28]和5’-TCAgTggCCCAggAggCgCAgCATC-3’[SEQ?ID?NO:29]進(jìn)行PCR擴(kuò)增；和亞克隆擴(kuò)增產(chǎn)物至pcDNA3.1/V5-HisTOPO?TA載體。

8.一種制備V5標(biāo)簽的FDXR(鐵氧還蛋白還原酶)cDNA的方法，該方法包括：用引物序列：正向：5’-CTgTTCCCAgCCATggCTTCgCgCTg-3’[SEQ?ID?NO:30]，反向：5’-gTggCCCAggAggCgCAgCATC-3’[SEQ?ID?NO:31]進(jìn)行PCR擴(kuò)增；和亞克隆擴(kuò)增產(chǎn)物至pcDNA3.1/V5-HisTOPO?TA載體。

9.一種產(chǎn)生重組腺病毒的方法，該方法包括：制備攜帶野生型FHIT?cDNA的重組腺病毒(AdFHIT)；和使用以下列寡核苷酸進(jìn)行的PCR產(chǎn)生His標(biāo)簽的FHIT?cDNA：5'-ACgTggATCCCTgTgAggACATgTCgTTCAgATTTggC-3'(正向)[SEQ?ID?NO:26]，和5'-TTgTggATCCTTATCAgTgATggTgATggTgATgCgATCCTCTCTgAAAgTAgACCCgCAg-3'[SEQ?ID?NO:27]。

10.一種在癌癥細(xì)胞中觸發(fā)凋亡的方法，該方法包括恢復(fù)所述癌癥細(xì)胞中的Fhit蛋白的表達(dá)。