[發(fā)明專利]一種BP180 NC16A IgE抗體的間接免疫熒光檢測試劑盒及檢測方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410136829.4
• 申請(qǐng)日: 2014-04-04
• 公開（公告）號(hào): CN103913567A
• 公開（公告）日: 2014-07-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 左亞剛;劉冰;孫秋寧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/543
• 分類號(hào): G01N33/543;G01N21/64
• 代理公司: 北京華沛德權(quán)律師事務(wù)所 11302
• 代理人: 劉杰

1.一種皮膚基底膜抗BP180NC16A?IgE抗體的間接免疫熒光檢測試劑盒，包括檢測底物，其特征在于，所述檢測底物的制備方法包括以下步驟：

將人皮膚或猴食管上皮切成1×0.5cm長方形，長軸垂直固定于冷凍切片冷凍頭上；

調(diào)整冷凍切片機(jī)冷凍箱及冷凍臺(tái)溫度至-20℃，切片厚度8μm后開始切片，皮膚切片附著于防脫玻璃載玻片上，每片粘附兩塊皮膚組織，距離盡可能遠(yuǎn)；

切好的載玻片迅速浸于丙酮中固定5min，取出晾干后放入標(biāo)本盒，存入-80℃超低溫冰箱，得到所述檢測底物。

2.一種皮膚基底膜帶抗BP180NC16AIgE抗體的間接免疫熒光檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

采用復(fù)孔檢測，向權(quán)利要求1所述的試劑盒的檢測底物中加入倍比稀釋的待測樣本及一份陰性對(duì)照血清，所述陰性對(duì)照為經(jīng)蛋白印跡法檢測不含BP180NC16A?IgE抗體的血清，在37℃恒溫條件下一抗孵育，1h后用PBST第Ⅰ次洗滌；

用PBS將FITC標(biāo)記的鼠抗人IgE抗體原液稀釋500倍，得到二抗稀釋液；

向經(jīng)過第Ⅰ次洗滌的檢測底物中加入所述二抗稀釋液，在37℃恒溫條件下二抗孵育，1h后用PBST第Ⅱ次洗滌；

向經(jīng)過第Ⅱ次洗板的檢測底物中加入甘油，終止反應(yīng)；

顯色終止后以倒置熒光顯微鏡觀察皮膚基底膜帶處是否有線狀熒光沉積，無基底膜線狀沉積者為陰性，有基底膜線狀沉積者為陽性。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測方法，其特征在于，所述待測樣本為經(jīng)過PBS倍比稀釋的血清或者水皰液。