[發(fā)明專利]一種用于檢測與食管癌相關miRNA基因的FISH探針組合物、試劑盒及其使用方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410136226.4
• 申請日: 2014-04-04
• 公開（公告）號: CN103866040A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發(fā)明（設計）人: 吳偉東;王曉香;周劍;董先輝;劉雪媚
• 申請（專利權）人: 廣州伯信生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利代理有限公司 44202
• 代理人: 王會龍

技術領域

本發(fā)明涉及分子生物學領域，具體涉及一種用于檢測與食管癌相關miRNA基因的FISH探針組合物、試劑盒及其使用方法。?

背景技術

MicroRNAs（miRNAs）是近些年來發(fā)現(xiàn)的一類內源性的具有調控功能的非編碼小分子RNA，其大小長約20～25個核苷酸。miRNA基因在細胞核內由RNA聚合酶II轉錄后形成初級轉錄產(chǎn)物（pri-RNAs）。Pri-RNA經(jīng)過一系列加工處理后成為19-25bp左右的成熟miRNA。成熟的miRNA在細胞中可以與蛋白質結合形成RNA誘導沉默復合物（RNA?induced?silencing?complex,RISC）。RISC與靶mRNA基因不完全配對時，可以阻斷miRNA的翻譯過程，降低表達；RISC與靶mRNA完全配對時，則可以導致mRNA的降解。miRNA通過阻斷或者降解的mRNA表達來控制靶基因的表達，從而達到調控基因的分化、凋亡等一系列的過程【Hobert?O.Gene?regulation?by?transcription?factors?and?microRNAs[J].Science,2008,319(5871):1785-1786】。?

腫瘤的發(fā)生發(fā)展與基因密不可分，環(huán)境因素以及遺傳等的因素都可以導致或者引起DNA的變化，從而激活原癌基因或引起腫瘤抑制基因的滅活，引起基因表達水平的異常，使靶細胞發(fā)生轉化。研究發(fā)現(xiàn)，超過50%的miRNA基因位于原癌基因或抑癌基因的染色體脆性位點（fragile?sites）或相關遺傳區(qū)域【Calin等，Human?microRNA?genes?are?frequently?located?at?fragile?sites?and?genomic?regions?involved?in?cancers[J].Proc?Natl?Acad?Sci?U?S?A,2004,101(9):2999-3004.】。miRNA基因往往在腫瘤中發(fā)生異常表達，其在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中能夠作為致癌因子或抑癌因子參與腫瘤的各個過程，對比腫瘤細胞?與正常組織細胞間來源的miRNA發(fā)現(xiàn)，其表達譜具有明顯差異【Castilla等，Micro-RNA?signature?of?the?epithelial-mesenchymal?transition?in?endometrial?carcinosarcoma[J].J?Pathol,2011,223(1):72-80.】。研究表明miRNA在細胞凋亡、增殖、分化、血管生成及腫瘤形成等方面均具有重要的調節(jié)作用，參與人體大約30％的基因調節(jié)，與心血管疾病、腫瘤、免疫紊亂及代謝紊亂等多種發(fā)病有關。已有研究發(fā)現(xiàn)若干miRNA的負調控作用與白血病、乳腺癌、肺癌、肝癌和結腸癌等高度相關。因此，miRNA在腫瘤診斷以及判斷預后等方面具有重要的參考價值。?

食管癌是最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，是世界上發(fā)病率第八死亡率第六的癌癥，我國是食管癌的高發(fā)地區(qū)，每年因食管癌死亡人數(shù)約為15萬人，其死亡率占我國惡性腫瘤死亡率的第四位，近年來發(fā)病及死亡雖有下降趨勢，但目前仍然處于較高水平。如今新輔助化療的運用，抗腫瘤生物靶向藥物的出現(xiàn)，基因制劑的研制，食管內鏡等微創(chuàng)外科的開展都為食道癌患者帶來了福音。但是食道癌的發(fā)病率和死亡率仍較高。目前食道癌的存活率仍較低，僅有3%～5%的患者能夠存活5年。由于早期癥狀不明顯，大部分臨床食管癌患者已到中晚期，且半數(shù)以已上發(fā)生腫瘤遷移。因此，提高食道癌的早期診斷水平和治療是至關重要的。?