[發(fā)明專利]連翹中抗腫瘤活性物質(zhì)的提取方法及其產(chǎn)品和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410135783.4
• 申請日: 2014-04-04
• 公開（公告）號: CN103933125A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李鑫;劉微;李洪源;李丹娜
• 申請（專利權(quán)）人: 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: A61K36/634
• 分類號: A61K36/634;A61P35/00
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;費(fèi)碧華

1.一種從連翹中提取抗腫瘤活性物質(zhì)的方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）連翹水提液的制備

連翹經(jīng)過篩除塵后，水洗浸泡過夜，次日文火煮沸，過濾，收集濾液，蒸發(fā)濃縮，制成水提液，滅菌，標(biāo)記為FS-1，置4℃冰箱保存?zhèn)溆茫?/p>

（2）乙醇沉淀法初步分離抗腫瘤有效部位

取連翹水提液FS-1置于塑料離心管中，然后向其中分次緩慢加入質(zhì)量百分比濃度為90%-100%的乙醇溶液，并不斷震蕩，直至乙醇溶液的體積達(dá)到溶液總體積的90%-95%為止，將離心管置于4℃冰箱8-14h，低溫離心，收集上清液，上清液經(jīng)濾紙過濾，減壓濃縮后，置于4℃冰箱備用，標(biāo)記為FS-2；

（3）大孔吸附樹脂柱層析法分離連翹抗腫瘤有效部位

取FS-2，緩慢加入到預(yù)處理好的大孔吸附樹脂柱頂端，加入量為2%柱體積，待FS-2滲入樹脂層，依次用蒸餾水、質(zhì)量百分比濃度為30%、60%、90%的乙醇溶液，以5.00ml/min流速進(jìn)行洗脫，收集洗脫部分，質(zhì)量百分比濃度為90%的乙醇洗脫液經(jīng)100℃條件下減壓濃縮后，標(biāo)記為FS-3；

（4）薄層層析法分離連翹抗腫瘤活性物質(zhì)

按照苯：正己烷：甲醇：冰乙酸的體積比=14-16：14-16：0.5-1.5：0.5-1.5配制展開劑，將FS-3于室溫25℃下在薄層制備板上展開，展開時(shí)間50-60min，晾干；然后，通過碘熏法熏染薄層制備板，并在紫外燈照射下觀察，即發(fā)現(xiàn)FS-3分為13個(gè)條帶，收集從薄層制備板上數(shù)的第4個(gè)條帶，標(biāo)記為FS-4，即為抗腫瘤活性物質(zhì)。

2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟（1）按照以下步驟進(jìn)行：連翹經(jīng)過篩除塵后，用自來水清洗3-6遍，再用蒸餾水洗2-4遍，然后加蒸餾水使液面高出連翹8-15cm，浸泡過夜；次日文火于100℃煮沸，1-3h后趁熱用脫脂棉過濾，藥渣重復(fù)提取，再用脫脂棉過濾，將兩次濾液混合，于100℃蒸發(fā)濃縮至1.00mg/ml，制成水提液，經(jīng)三日間歇平壓滅菌法滅菌，每次40min，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?!-- SIPO -->

3.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟（2）中所述的低溫離心是指于4℃，4000r/min離心15min。

4.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟（3）中所述的大孔吸附樹脂柱為X-5型大孔吸附樹脂柱。

5.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟（4）中所述的展開劑按照苯：正己烷：甲醇：冰乙酸的體積比=15：15：1：1配制，展開時(shí)間為55min。

6.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟（4）中所述第4個(gè)條帶的收集方法包括以下步驟：

（1）從薄層制備板上將上數(shù)第4個(gè)條帶切割下來放入小燒杯中；

（2）向燒杯中加入無水乙醇，攪拌，沉淀20-24h后收集上清液，用脂溶性的0.22μm濾膜過濾，得到過濾后的上清液，備用，重復(fù)步驟（2）2-3次；

（3）將收集的過濾后的上清液混合后，再離心，取上清液，減壓濃縮后以脂溶性的0.22μm的濾膜過濾，濾液經(jīng)冷凍干燥制成粉末，標(biāo)記為FS-4，即為抗腫瘤活性物質(zhì)。

7.按照權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的方法制備得到的抗腫瘤活性物質(zhì)。

8.權(quán)利要求7所述的抗腫瘤活性物質(zhì)在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

9.按照權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于所述的腫瘤為胃癌。