[發明專利]一種鐵皮石斛原球莖的冷凍誘導方法

有效

• 申請號: 201410134835.6
• 申請日: 2014-04-04
• 公開（公告）號: CN103891617A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 李海燕;張玉宜;楊洋;胡玉華;張希菊;陳麗
• 申請（專利權）人: 廣東國方醫藥科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及鐵皮石斛組培技術領域，尤其涉及一種鐵皮石斛原球莖的冷凍誘導方法。

背景技術

《中國藥學大詞典》稱鐵皮石斛“專滋肺胃之氣液,氣液沖旺,腎水自生”,說它善于養陰生津，治療陰虛津虧諸癥。鐵皮石斛除滋陰外,還有養血的功能,清代《藥性論》說鐵皮石斛能補腎積精，養胃陰、益氣力。鐵皮石解內含有豐富的多糖類物質,可促進人體平衡,有效增強體質,從而有效增強免疫力。綜上所述，鐵皮石斛具有巨大的商業價值，但是因為人們長期的野外采挖，野生的鐵皮石斛已經到了瀕危的狀況，另外鐵皮石斛坐果率很低，種子不易發芽，自然繁殖率極低。采用組培方法進行鐵皮石斛的快速繁殖是最實用的一種技術，但存在繁殖率較低，分化慢，難于進行批量生產和工廠化生產等問題。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明在于提供一種鐵皮石斛原球莖的冷凍誘導方法。

為實現上述目的，本發明通過下述技術方案予以實現?：

一種鐵皮石斛原球莖的冷凍誘導方法，包括誘導培養基的配制、果實或莖芽的消毒、原球莖的冷凍誘導三個步驟，取消毒后的鐵皮石斛成熟果實中的種子或成年植株的莖芽接種在誘導培養基上，置于-7~-10^oC環境中，暗培養4~6小時，再轉移至20~25^oC環境中，光照強度2000~3000Lx下培養3~4個月，原球莖的誘導發生比一般培養提高15~20%以上，并且成苗一致整齊。

所訴的誘導培養基的配制步驟為，按照每升水加入NH₄NO₃??1~3g、CaHPO₄??0.1~0.2g、KH₂PO_4??0.2~0.3g、FeSO₄.7H₂O??0.01~0.03g、蔗糖20~30g、土豆?100~150g、瓊脂5~7g的配比配制培養基，調PH值到6.8，然后分裝在組培瓶內高溫消毒，冷卻備用。

所述的種子或莖芽的消毒步驟為，取鐵皮石斛成熟果實或成年植株的莖芽放置于烘箱紅外干燥后的燒杯中使用洗潔精的水溶液浸泡20分鐘，再用純凈水沖洗到沒有泡沫為止，然后采用75%酒精滅菌3分鐘，無菌水漂洗3遍后使用0.1%升汞消毒5分鐘，無菌水漂洗3遍，升汞消毒流程重復3次，或者使用0.1%升汞消毒15分鐘漂洗5~7次。消毒后，取鐵皮石斛成熟果實中的種子或成年植株的莖芽接種到誘導培養基上。

本發明的有益效果為：本發明使原球莖的誘導發生比一般培養提高15~20%以上，并且成苗一致整齊，另外，擺脫了傳統生產中添加激素成分等繁瑣步驟，不存在誘變、污染等食品安全問題，操作簡單，成本較低，可工廠化生產。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明的具體實施方式作進一步詳細地描述。

實施例1：

以鐵皮石斛成熟果實為外植體，放置于烘箱紅外干燥后的燒杯中使用洗潔精的水溶液浸泡20分鐘，再用純凈水沖洗到沒有泡沫為止，放入超凈工作臺，然后采用75%酒精滅菌3分鐘，無菌水漂洗3遍后使用0.1%升汞消毒5分鐘，無菌水漂洗3遍，升汞消毒流程重復3次。在超凈工作臺內取成熟果實置于無菌濾紙上，切去兩端后縱切，然后將果實內的種子撒播于分裝在組培瓶內高溫消毒、冷卻備用的誘導培養基上，蓋上組培瓶蓋子并擰緊封上保鮮膜。將組培瓶放入冷凍恒溫培養箱內，溫度設為-7~-10^oC，暗培養4~6小時，而后轉入人工培養室，溫度控制在20~25^oC，光照強度控制在2000~3000Lx，培養3~4個月，成苗整齊一致即可進行下一步工序。

本實施例中所述的誘導培養基配制方法為，按照每升水加入NH₄NO₃??1~3g、CaHPO₄??0.1~0.2g、KH₂PO_4??0.2~0.3g、FeSO₄.7H₂O??0.01~0.03g、蔗糖20~30g的配比加入攪拌容器中，然后加入所述配比的純凈水攪拌溶解，再加入搗成泥狀的土豆?100~150g/L、瓊脂5~7g/L，使用NaOH稀溶液調PH值到6.8，然后分裝在組培瓶內并將組培瓶放入高壓消毒鍋高溫消毒，高壓消毒鍋壓力設為0.2MPa、消毒溫度設為121℃、消毒時間設為20分鐘，消毒結束后培養基冷卻備用。

實施例2：