[發明專利]一種陽離子脂質體及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201410134762.0
• 申請日: 2014-04-03
• 公開（公告）號: CN103933579A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 王士斌;陳偉光;陳愛政;劉源崗;吳文果
• 申請（專利權）人: 華僑大學
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61P35/00;C12N15/87
• 代理公司: 泉州市文華專利代理有限公司 35205
• 代理人: 陳智海

【技術領域】

本發明涉及一種陽離子脂質體及其制備方法和應用。

【背景技術】

非病毒基因載體是基因治療中目前最有潛力的載體之一，特別是陽離子脂質體，具有相對于病毒基因載體由于其可以大批量生產且生產成本低、可重復、安全性高、低免疫源性、生物相容性好，同時可以載入大小達52kb的外源基因片段等優點。目前該載體已成為基因治療的研究熱點之一。

雖然目前陽離子脂質體主要由于帶較高電荷，可致細胞發生如胞質收縮、抑制正常細胞分裂、抑制蛋白激酶活性、在胞質中產生空泡等毒性，但是通過對陽離子脂質體進行修飾或加入陰性高聚物、輔脂、尋找最佳N/P等手段可以獲得高轉染率、高的靶向性、低細胞毒性的陽離子脂質體。其在臨床上已得到越來越多的應用。其中以陽離子脂質體DMRIE/DOPE為基因載體，將囊性纖維化基因(pGT21)轉運至靶細胞，現已處于臨床Ⅰ期研究階段；目前在德國載有紫杉醇的DOTAP陽離子脂質體已進入臨床II期試驗。

至今癌癥仍然是不可治愈之癥，無論在發達國家還是發展中國家均成為生命的主要殺手。在癌癥誘發、促發、惡化的整個過程中，由于其為擴張性、彌漫性侵蝕生長模型，同時整個過程發生機制極其復雜，目前尚未找到一種有效治療方法。傳統癌癥治療方法，如外科、化療、放療等，在大多情況下治療效果仍然是不理想，因為癌癥外科手術后有很大復發可能性，化療的毒副作用及超過一半的癌癥都會產生多藥耐藥性，放療對正常組織會有嚴重殺傷作用，這些均是傳統癌癥治療所面臨的主要挑戰，因此新型、有效的癌癥治療策略亟待出現。陽離子脂質體(cationicliposome,CLP)常由荷正電的磷脂（cationiclipids）與中性輔助磷脂(co-lipids)共同組成。由于帶正電的脂質與荷負電的核酸（DNA、RNA、寡聚核苷酸（AODNS））靜電作用形成陽離子脂質體-基因復合物（lipoplexes），再與化療藥物可形成陽離子脂質體-基因-化療藥物三元復合體，通過皮下注射或是腹腔注射，進行血液循環進入靶器官，并與荷負電的細胞膜表面作，通過內吞作用或細胞融合作用過進入胞內，經過一系列運輸，最后進入細胞核，進行相關基因表達、沉默（敲除）與藥物治療作用。目前常用的基因載體分為病毒基因載體與非病毒基因載體兩類。常見的非病毒基因載體如陽離子高聚物、磷酸鈣、陽離子多肽及陽離子脂質體等。其中發展最為成熟的是陽離子脂質體。但缺點是其轉染效率仍然低于病毒基因載體，因此有必要研制安全性與轉染活性更佳的新型脂質體，采用陽離子脂質體共載基因與化療藥物進行聯合治療，以發揮更好治療效果。

聯合治療模型即共載化療藥物與基因，無論在體內還是體外實驗中均已證明該模型能夠有效抑制腫瘤長、繁殖、擴散。特別是在多藥耐（multidrug-resistant，MDR）癌癥中發揮更明顯作用。近三年來，陽離子脂質體被研究學者廣泛用于共載基因與化療藥物進行癌癥的聯合治療。

目前，本領域已有試圖通過聯合多基因進行癌癥治療的報道，并在體外實驗取得一定效果。但是基因干擾技術的瓶頸之一為基因本身的毒性，因此有必要將基因與化療藥物進行共載，特別是在MDR腫瘤模型中，共載基因與藥物載體體內外實驗結果表明：共載基因與化療藥物陽離子脂質體比單包載基因或化療藥物陽離子脂質體進行治療，療效更佳，表現出協同增效作用。

【發明內容】

本發明要解決的技術問題之一，在于提供一種陽離子脂質體，其穩定性與轉染基因后的轉染效率得到了很大的提高。

本發明是這樣實現上述技術問題之一的：

一種陽離子脂質體，所述陽離子脂質體由以下重量份的組分采用逆向蒸發法制備而成：1重量份DOPE、1重量份DC-Chol、2.5重量份OQCMC。

本發明要解決的技術問題之二，在于提供一種陽離子脂質體的制備方，該方法制備的陽離子脂質體穩定性與轉染基因后的轉染效率得到了很大的提高。

本發明是這樣實現上述技術問題之二的：

一種陽離子脂質體的制備方法，包括以下步驟：

步驟10、按配比取1重量份DOPE、1重量份DC-Chol、2.5重量份OQCMC溶于三氯甲烷溶劑中；

步驟11、將步驟10得到的溶液拌勻，加入超純水共混，探頭超聲10min；

步驟12、將步驟步驟11得到產物在旋轉蒸發儀將殘留溶劑去除，真空狀態，即得；所述旋轉蒸發儀的蒸發溫度為35℃。

本發明要解決的技術問題之三，在于提供一種陽離子脂質體復合體，其能大大減少化療藥物的使用劑量，減少病人的給藥次數，大大增加病人的順延性。