[發明專利]一種免疫磁珠及其快速檢測奧奈達希瓦氏菌的方法

有效

• 申請號: 201410133860.2
• 申請日: 2014-04-03
• 公開（公告）號: CN103954750A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發明（設計）人: 溫俊林;周順桂;陳俊華
• 申請（專利權）人: 廣東省生態環境與土壤研究所
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N33/569;G01N21/78
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 鄭瑩

1.一種免疫磁珠，其特征在于：其制備方法包括以下步驟：

1）制備奧奈達希瓦氏菌特異性抗體；

2）將羧基化聚苯乙烯磁性微球活化，洗滌干凈，然后與步驟1）中制備的奧奈達希瓦氏菌特異性抗體進行振蕩孵育，使抗體與磁珠充分結合；

3）將孵育的磁珠洗滌干凈，然后封閉，清洗干凈，4℃保存，即可獲得免疫磁珠。

2.一種快速檢測奧奈達希瓦氏菌的方法，其特征在于：包括以下步驟：

1）將權利要求1所述的免疫磁珠加入待測樣品溶液中，在18～27℃下振蕩反應，使免疫磁珠上的抗體與奧奈達希瓦氏菌體抗原充分結合；

2）步驟1）中結合反應完成后，用磁鐵將免疫磁珠與樣品基質分開，去樣品基質，得到免疫磁珠-奧奈達希瓦氏菌免疫復合體；?

3）將2）中得到的免疫磁珠-奧奈達希瓦氏菌免疫復合體洗滌干凈，加入顯色液，發生顯色反應，使藍色產物生成完全；?

4）向藍色產物中加入硫酸溶液終止顯色反應，藍色產物轉化為黃色產物，檢測其在450納米處OD值，若OD值在0.029以上，說明此樣品中含有奧奈達希瓦氏菌。

3.根據權利要求2所述的一種快速檢測奧奈達希瓦氏菌的方法，其特征在于：步驟1）中免疫磁珠與樣品溶液體積比為（1～5）：50。

4.根據權利要求2所述的一種快速檢測奧奈達希瓦氏菌的方法，其特征在于：步驟1）中所述振蕩反應的時間為10～70min。

5.根據權利要求2所述的一種快速檢測奧奈達希瓦氏菌的方法，其特征在于：步驟3）中所述洗滌的具體過程為先用含4～6%（v/v）吐溫20的PBS緩沖液洗滌3～4次，再用純水洗滌干凈。

6.根據權利要求2所述的一種快速檢測奧奈達希瓦氏菌的方法，其特征在于：步驟3）中所述顯色液的體積與樣品溶液體積的比為（0.8～1.2）：5。

7.根據權利要求2所述的一種快速檢測奧奈達希瓦氏菌的方法，其特征在于：步驟3）中所述顯色液含有的0.1～5mM過氧化氫，90～110mM檸檬酸鈉，190～210mM磷酸氫二鈉，0.3～0.35mM四甲基聯苯胺，pH值為?4～5。

8.根據權利要求3所述的一種快速檢測奧奈達希瓦氏菌的方法，其特征在于：步驟3）中所述顯色反應時間為5～60min。