[發明專利]一種具有抗菌活性的化合物及其制備方法

有效

• 申請號: 201410132696.3
• 申請日: 2014-04-02
• 公開（公告）號: CN103980266A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發明（設計）人: 馬忠俊;余立雁;王丹;胡志飛;胡志娟
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C07D413/14
• 分類號: C07D413/14;A61P31/04;C12P17/16;C12R1/465;C12R1/19
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

技術領域

本發明涉及細菌培養制備化合物領域，具體涉及一種具有抗菌活性的化合物及其制備方法。

背景技術

尋找新的活性好的抗生素是當今世界的一大難題。微生物是抗生素的主要來源，但是人們已經很難從現有菌株的二次代謝產物發現新抗生素，少數發現的新菌株，其二次代謝產物的抗菌活性往往也不太理想。海洋微生物中蘊藏著豐富的活性二次代謝產物，其研究開發，是解決當前陸地藥用資源緊張的重要手段，對于人類重大疾病的治療具有十分重要的意義。

海洋微生物能表達許多重要的次級代謝產物，但是在自然狀態下，次級代謝產物表達的量極其微少或者不表達，只有在外界環境的刺激下，其表達的量才會增加。共培養作為增加微生物次級代謝產物表達的一種方式，是微生物活性二次代謝產物發現的重要研究手段。

申請公布號CN1371379A（申請號為00812158.3）的中國發明專利申請公開了一種從海洋放線菌中得到的新吲哚并咔唑生物堿，結構如式（1）所示，其中，R¹是氫原子、含1到6個碳原子的烷基或含1到6個碳原子的烷氧基，R²是氫原子、含1到6個碳原子的烷基或含1到6個碳原子的烷氧基。該化合物或可藥用的鹽可用于制備治療或預防哺乳動物惡性腫瘤的藥物。該化合物通過放線菌菌種CLCO-002在適當的培養基中在受控條件下培養得到，該菌種在有氧和中溫條件下于液體培養基中培養，溫度為22℃至35℃，pH在6.0至8.0之間。

發明內容

本發明提供了一種結構新穎的具有抗菌活性的化合物，該新化合物利用共培養發酵方法，從海洋放線菌共培養發酵液中分離制備得到。該化合物對金黃色葡萄球菌的抑菌效果顯著，優于鹽酸四環素。

一種具有抗菌活性的化合物，為式I結構的化合物；

本發明提供了一種式I結構的具有抗菌活性的化合物的制備方法，由海洋放線菌和大腸桿菌共培養發酵產生，再通過分離純化得到，易于操作和實施。

一種具有抗菌活性的化合物的制備方法，包括以下步驟：

1）將海洋放線菌接種于發酵培養基中，靜置培養5～10天，優選溫度為25～30℃，得到接種有海洋放線菌的發酵培養基；

2）再將大腸桿菌接種于步驟1）中的接種有海洋放線菌的發酵培養基中，靜置共培養10～20天，優選溫度為25～30℃，得到共培養發酵液；

3）將共培養發酵液分離純化得到式I結構的化合物，即具有抗菌活性的化合物。

步驟1）中，所述的發酵培養基，以1L計，由以下重量組分制成：

酵母提取物???????????????????????????1-10g；

甘油?????????????????????????????????1-15g；

海水?????????????????????????????????余量；

通過酸堿緩沖液將該發酵培養基調節pH至7-8。

步驟1）中，所述的海洋放線菌，可采用現有技術，具體可采用市售產品，如采用北京北納創聯生物技術研究院出售的海洋鏈霉菌Streptomyces?sp.MCC1A03740。

步驟2）中，所述的大腸桿菌，可采用現有技術，具體可采用市售產品，如采用北京北納創聯生物技術研究院出售的大腸桿菌Escherichia?coli?ATCC35218，所述的大腸桿菌的接種體積為發酵培養基體積的0.1%-5%。

步驟3）中，所述的分離純化包括：將共培養發酵液用乙酸乙酯或二氯甲烷萃取，萃取液濃縮后進行硅膠柱層析，薄層檢識得到所需要的餾分，再通過反相色譜純化，得到式I結構的化合物。

所述的硅膠柱層析的條件：采用的流動相為體積比為10～2：1的石油醚-乙酸乙酯溶液或體積比為100:0～2的二氯甲烷-甲醇溶液。所述的反相色譜純化的條件：采用的填料為十八烷基鍵合硅膠，采用的流動相為體積比為65～80：35～20甲醇-水的溶液或者35～50:65～50乙腈-水的溶液。

對本發明式I結構的具有抗菌活性的化合物進行了抗菌活性檢測，該化合物顯示出良好的抗菌活性，其對金黃色葡萄球菌的抑制作用優于陽性藥物鹽酸四環素，該新化合物在堿性條件下抗菌作用增加，由于許多抗生素在堿性條件下抗菌效果會減弱，因此，該化合物在特殊生理環境的抗菌治療中有很好的應用前景。

與現有技術相比，本發明具有如下優點：