[發明專利]一種野生早熟禾AFLP指紋圖譜的建立方法及用途

無效

• 申請號: 201410131779.0
• 申請日: 2014-04-02
• 公開（公告）號: CN103898220A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 董沁;白小明;孫吉雄;方強恩;呂優偉;雷婭偉;王婷;趙春旭;賀佳圓
• 申請（專利權）人: 甘肅農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種野生早熟禾AFLP指紋圖譜的建立方法，其特征在于，包括基因組DNA提取、酶切、連接、預擴增、選擇性擴增、聚丙烯酰胺凝膠電泳6個步驟，具體為：用改良的CTAB法提取野生早熟禾基因組DNA，利用瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的純度和濃度，然后對其進行雙酶切和酶切產物的檢測，用連接酶連接過夜后用預擴增引物進行預擴增，經過擴增產物的篩選和電泳條件的調整，選出引物和電泳條件，對預擴增產物進行擴增，最后，擴增產物通過聚丙烯酰胺凝膠電泳和銀染程序可觀察條帶。

2.根據權利要求1所述的野生早熟禾AFLP指紋圖譜的建立方法，其特征在于，進一步優選，用改良的CTAB法提取野生早熟禾基因組DNA時，取0.5g新鮮的幼嫩葉片，提取過程中，氯仿：異戊醇體積比為24：1，翻轉離心管使其混勻，用75%乙醇洗滌沉淀兩次，最后，將DNA保存于70μLTE中，放置在-20℃冰箱中備用，檢測時使用0.8%瓊脂糖凝膠；

酶切時，選用限制性內切酶EcoRⅠ和MseⅠ，酶切時間為3.5h；連接所使用的連接酶為T4DNA連接酶，保持22℃16h以上；

預擴增產物稀釋倍數為10；擴增時引物濃度為EcoR?I?primer50ng/μL和Mse?I?primer50ng/μL分別取1.0μL，在對擴增產物進行聚丙烯酰胺凝膠電泳時，功率為45w，電流為80mA，電壓為1200v，進行電泳約2小時10分鐘。

3.權利要求1所述野生早熟禾AFLP指紋圖譜在早熟禾屬植物種質資源的鑒定、品種鑒別與保護中應用。