[發明專利]一種基于胃液多重實時PCR檢測的幽門螺桿菌（HP）個體化治療輔助診斷方法在審
| 申請號： | 201410131307.5 | 申請日： | 2014-04-02 |
| 公開（公告）號： | CN103911446A | 公開（公告）日： | 2014-07-09 |
| 發明（設計）人： | 張建中;彭賢惠;劉杰;何利華;趙飛;閆笑梅;張茂俊;張慧芳 | 申請（專利權）人： | 中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產權代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 102206 北京*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 胃液 多重 實時 pcr 檢測 幽門 螺桿 hp 個體化 治療 輔助 診斷 方法 | ||
1.一種基于胃液的幽門螺桿菌個體化治療多重實時PCR檢測方法所用的引物和探針組合，其特征在于，
2.包含權利要求1所述的引物和探針的試劑盒。
3.權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，
其中，胃液預處理方法包括將新鮮（或融化的凍存）的胃液標本進行渦旋震蕩至均勻，取出10-500μl胃液標本，加入等量的Tris緩沖液（0.67M，pH7.4），振蕩均勻，室溫放置2h。13000rpm離心5min，棄上清留沉淀。
4.前述任一項權利要求所述的試劑盒，其特征在于，所述的Tris緩沖液（0.67M，pH7.4）的配制方法如下：取81.16g?Tris至800ml?ddH2O中，滴加濃鹽酸至pH7.4，加入ddH2O定容至1L。
5.前述任一項權利要求所述的試劑盒，其特征在于，
還包括在每一反應體系中提供相應的陽性對照和陰性對照。
6.前述任一項權利要求所述的試劑盒，其特征在于，
陽性對照、陰性對照包括九種陽性對照和一種大腸桿菌陰性對照，其中九種陽性對照分別為含有cag?H、RNase?P、HP23S?rDNA-AA、HP23S?rDNA-GA、HP23S?rDNA-AG、CYP2C19-2A、CYP2C19-2G、CYP2C19-3A、CYP2C19-3G目的基因的質粒。
7.前述任一項權利要求所述的試劑盒，對照濃度均為1×106copies/μl。
8.前述任一項權利要求所述的試劑盒，其特征在于，
當多重實時PCR擴增反應體系為20μl反應體系時，其優選配置為：
9.前述任一項權利要求所述的試劑盒，其特征在于，
多重實時PCR反應程序為：95℃10min；95℃10s，58℃45s，45個循環，讀板。
10.前述任一項權利要求所述的試劑盒，其特征在于，
對有效擴增的情況下，樣品檢測結果可信，否則試驗需要重復；在檢測中的陽性對照為有效擴增時，樣本結果判斷標準如下：
（1）.組合①中綠色曲線起峰，表示DNA標本提取正確，在此基礎上，其他結果判定有效；如果沒有綠色曲線擴增，表示DNA提取失敗，其他結果均不可信；
（2）.組合①中藍色曲線起峰，表示有HP感染，Ct值應小于38；
（3）.組合②中藍色曲線起峰，表示HP23S?rRNA基因為野生型；
（4）.組合②中綠色曲線起峰，表示HP23S?rRNA基因為A2143G或A2142G突變型；
（5）.組合②中藍色和綠色曲線起峰，表示患者被兩株（或三株）HP感染，一株為HP23S?rRNA基因野生型，一株為突變型；
（6）.組合①中綠色曲線，而組合②中藍色或綠色曲線起峰，Ct值小于38表示被cagH缺失的HP感染；
（7）.組合③中藍色曲線先起峰表示CYP2C19*3為G型；綠色起峰，表示CYP2C19*3為A型；
（8）.組合④中藍色曲線先起峰表示CYP2C19*2為G型；綠色起峰，表示CYP2C19*2為A型。
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