[發明專利]金黃色葡萄球菌酶聯免疫檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201410130674.3
• 申請日: 2014-04-02
• 公開（公告）號: CN103869074A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 劉箐;郭慧琴
• 申請（專利權）人: 上海理工大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/02
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

技術領域

本發明屬于生物技術和免疫學領域，具體涉及一種檢測金黃色葡萄球菌的酶聯免疫試劑盒。

背景技術

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus?aureus）是最常見的食源性致病菌，廣泛存在于自然環境中。金黃色葡萄球菌主要污染奶、肉、蛋、魚及其制品等動物性產品，包括奶制作的飲料、冷飲、糕點，熟肉、肉制品罐頭，剩飯、油煎蛋、糯米糕、涼粉、剩大米和米酒等，俗名“嗜肉菌”。金黃色葡萄球菌侵染人體后主要會引起一下人體疾患，其一是侵襲性疾病如引起化膿性感染，如傷口化膿、蜂窩織炎，肺炎、腦膜炎、心包炎，敗血癥等；其二是由金黃色葡萄球菌產生的毒素性疾病，人食用后引起頭暈、惡心、腹瀉、嘔吐等急性胃腸炎等食物中毒癥狀，而由毒素引起的休克綜合癥表現為高熱、低血壓、腹瀉、皮疹、休克。

目前金黃色葡萄球菌的檢測主要依賴于國標所規定的生化鑒定，其缺點是操作繁瑣、檢測周期較長，無法適應大量的樣品篩查。免疫學檢測是近年來出現的最快速、準確、穩定的快速檢測手段，但是檢測產品全部依賴進口，我國目前尚無擁有完全自主知識產權，且可運用于檢測實踐的快速檢測產品，該專利以金黃色葡萄球菌為檢測靶標，所要求保護的技術涉及金黃色葡萄球菌快速檢測產品。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測金黃色葡萄球菌的試劑盒。

進而，本發明提供了一種用于檢測金黃色葡萄球菌的酶聯免疫試劑盒，所述的試劑盒含有：

（a）固相載體，所述的固相載體上包被有作為捕捉抗體的抗金黃色葡萄球菌單克隆抗體5D6D9G3B4，所述的抗金黃色葡萄球菌單克隆抗體5D6D9G3B4由小鼠雜交瘤細胞系5D6D9G3B4，CGMCC?No.8764產生；

（b）容器a，所述的容器a中裝有作為檢測抗體的抗金黃色葡萄球菌單克隆抗體5D2G2D9C1，所述的抗金黃色葡萄球菌單克隆抗體5D2G2D9C1由小鼠雜交瘤細胞系5D2G2D9C1，CGMCC?No.8763產生。

在一優選例中，所述的固相載體為酶標反應板。

在另一優選例中，所述的檢測抗體帶有可檢測的標記物。

在另一優選例中，所述的可檢測的標記物為辣根過氧化物酶。

在另一優選例中，所述的試劑盒還含有陽性對照和陰性對照。

在另一優選例中，所述的陽性對照為滅活的金黃色葡萄球菌菌液，所述的陰性對照為滅菌的腦心浸出液肉湯。

本發明各個方面的細節將在隨后的章節中得以詳盡描述。通過下文以及權利要求的描述，本發明的特點、目的和優勢將更為明顯。

附圖說明

圖1本發明的單克隆抗體的SDS-PAGE電泳圖

Lane1：5D2G2D9C1，Lane2：5D6D9G3B4

具體實施方式

本發明人的研究表明，以金黃色葡萄球菌作為免疫原，免疫Balb/c小鼠，分離純化得到兩株抗金黃色葡萄球菌單克隆抗體，即5D6D9G3B4，保藏號CGMCC?No.8764和5D2G2D9C1，保藏號CGMCC?No.8763，上述兩株單克隆抗體的抗體效價可達到1:100000，其能夠特異性、高效地與金黃色葡萄球菌結合。以上述單克隆抗體5D6D9G3B4包被酶標反應板作為捕捉抗體，用辣根過氧化物酶標記的上述單克隆抗體5D2G2D9C1作為檢測抗體，制作酶聯免疫檢測試劑盒。結果顯示，上述金黃色葡萄球菌檢測試劑盒檢測靈敏度達到10⁵cfu/ml，具有重復性、準確性好的優點，孔間誤差小于5%，板內CV小于3%。其與單增李斯特、豬霍亂沙門、鼠傷寒沙門、腸炎沙門、福氏志賀、宋內氏志賀、鮑氏志賀、出血性大腸桿菌O157:H7、阪崎腸桿菌、小腸耶爾森氏菌、肺炎鏈球菌、蠟樣芽孢桿菌等共計74種病原細菌均無交叉反應。

在此基礎上，本發明人進而根據雙抗體夾心酶聯免疫法，經過反復測試，終于獲得了一種可快速、高效檢測食源性金黃色葡萄球菌的酶聯免疫試劑盒。

抗體

本發明包括兩株抗金黃色葡萄球菌單克隆抗體。本發明的兩株抗金黃色葡萄球菌單克隆抗體可以利用小鼠雜交瘤細胞系5D6D9G3B4（CGMCC?No.8764）和小鼠雜交瘤細胞系5D2G2D9C1（CGMCC?No.8763）分別分泌產生。