[發(fā)明專利]小RNA組成的指紋圖譜在人卵巢癌診斷和治療中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410130098.2
• 申請日: 2014-04-01
• 公開（公告）號: CN104975019B
• 公開（公告）日: 2019-07-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 譚若穎;朱苗駿;吳鴻菲;屠蕊沁
• 申請（專利權(quán)）人: 上海翔瓊生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/6886;C40B40/06;C12Q1/02
• 代理公司: 上海一平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 馬莉華;崔佳佳

本發(fā)明涉及小RNA組成的指紋圖譜在人卵巢癌診斷和治療中的應(yīng)用，由數(shù)個microRNA組成的指紋圖譜可非常有效地區(qū)分正常卵巢組織和卵巢癌組織，靈敏度高，特異性強，可有效用于卵巢癌診斷、腫瘤分級和預(yù)后評價。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明公開了一種小RNA(miRNA；microRNA)指紋圖譜在卵巢癌診斷中的用途，屬于生物醫(yī)學(xué)、生物工程和檢測技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

卵巢惡性腫瘤是女性生殖器官常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率僅次于子宮頸癌和子宮體癌而列居第三位(Jemal等人；2011)。但卵巢上皮癌死亡率卻占各類婦科腫瘤的首位，對婦女生命造成嚴(yán)重威脅。由于卵巢的胚胎發(fā)育、組織解剖及內(nèi)分泌功能較復(fù)雜，早期癥狀不典型，術(shù)前鑒別卵巢腫瘤的組織類型及良惡性相當(dāng)困難。卵巢惡性腫瘤中以上皮癌最多見，約占卵巢癌的80%-90%(Chan等人；2006)，其次是惡性生殖細(xì)胞腫瘤。卵巢上皮癌患者手術(shù)中發(fā)現(xiàn)腫瘤局限于卵巢的僅占30%，大多數(shù)已擴(kuò)散到子宮，大網(wǎng)膜及盆腔各器官。由于卵巢癌的早期癥狀不明顯，鑒別其腫瘤良性、惡性很困難，只有20%的患者能夠在進(jìn)行早期診斷出來，而近80%的患者就診時已屬晚期(Ahmed等人；1996、Etzioni等人；2003和Wright等人；2009)。

在卵巢癌早期診斷中，CA-125是目前研究最深入、應(yīng)用最廣泛的血清腫瘤標(biāo)志物，也是普遍使用的早期診斷工具之一，但是此標(biāo)志物特異性差，而且只能檢測30%的早期卵巢癌患者，所以早期診斷依然是卵巢癌的一大難題(Menon等人；2012)。

近年來不斷有文獻(xiàn)報道m(xù)iRNA在腫瘤診斷和治療中的作用，卵巢癌特異性miRNA的發(fā)現(xiàn)為其診斷和治療打開了一個全新的局面。miRNA是一類內(nèi)源性小分子非編碼RNA，結(jié)構(gòu)高度保守，具有表達(dá)時序性和組織特異性，通過與靶基因3'非編碼區(qū)(3'UTR)互補序列特異性結(jié)合，導(dǎo)致翻譯抑制或者mRNA降解，從而調(diào)節(jié)基因表達(dá)(Bartel；2004和Huang等人；2010)。miRNA在惡性腫瘤中表達(dá)譜各異并發(fā)揮著重要的調(diào)控作用，隨著大規(guī)模、高通量miRNA檢測技術(shù)的推廣應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)新的miRNA不僅為腫瘤的診斷和預(yù)后提供了頗具價值的標(biāo)準(zhǔn)，同時也為尋找新的腫瘤生物治療靶標(biāo)奠定了基礎(chǔ)(Mezzanzanica等人；2010)。

miRNA的表達(dá)水平和腫瘤細(xì)胞的分化程度密切相關(guān)，而常規(guī)的mRNA標(biāo)志物不具備此特點。Bendoraite等人通過qPCR定量卵巢癌細(xì)胞中miR-200家族的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)與在其余癌癥中報道的miR-200家族明顯低表達(dá)不同，在卵巢癌細(xì)胞中呈現(xiàn)高表達(dá)趨勢，通過軟件預(yù)測和3'UTR熒光素酶報告法發(fā)現(xiàn)其靶標(biāo)為ZEB1和ZEB2，且進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)在卵巢癌發(fā)展模式中，卵巢表皮細(xì)胞是先從間質(zhì)到上皮的轉(zhuǎn)移，這點也是與其他癌癥是先從上皮轉(zhuǎn)移到間質(zhì)過程相反(Bendoraite等人；2010)。ZEB轉(zhuǎn)錄因子是BMP信號通路的關(guān)鍵阻遏，Peart等人發(fā)現(xiàn)BMP信號通路通過調(diào)節(jié)AKT酶的活性從而達(dá)到調(diào)控腹水誘導(dǎo)的人類卵巢表皮癌的惡性程度(Peart等人；2012)。Li等人通過對人類轉(zhuǎn)移性漿液性卵巢癌細(xì)胞SKOV-3ip和低轉(zhuǎn)移人漿液性卵巢癌細(xì)胞SKOV-3做miRNA表達(dá)譜芯片和熒光定量PCR驗證，發(fā)現(xiàn)有多條差異表達(dá)的miRNA，特別是miR-22對卵巢癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲有抑制作用(Li等人；2012)。Xu等人還發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)miR-182和miR-96靶標(biāo)作用于FHB O3,對于調(diào)控卵巢癌細(xì)胞的增殖起著顯著作用(Xu等人；2013)。Wang和他的團(tuán)隊發(fā)現(xiàn)miR-182直接靶標(biāo)負(fù)調(diào)節(jié)作用于卵巢癌的腫瘤抑制子PDCD4(Wang等人；2013)。Li等人的進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，miR-183負(fù)調(diào)節(jié)Tiam1的表達(dá)，從而促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的遷移，侵襲和生長(Li等人；2012)。Stark等研究表明，miRNA可以調(diào)節(jié)腫瘤形成，而且暗示其中的某些簇(如miR-17-92)可能是潛在的人類原癌基因(Stark等人；2010)。