[發(fā)明專利]一種納豆枯草芽孢桿菌以及由該菌株提純維生素甲萘醌-7的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410129217.2
• 申請(qǐng)日: 2014-03-31
• 公開（公告）號(hào): CN103898175A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳杰鵬;段麗麗;陳煜藩;陳鴻銳;邱雪蓮;蔡桂珠;洪琳;胡留松;黃曉瑩;張?jiān)懒?/a>;許志鍇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東雙駿生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12P7/66
• 分類號(hào): C12P7/66;C12N1/20;C12R1/125
• 代理公司: 北京安信方達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11262
• 代理人: 蘇蕾;鄭霞

1.一種提純維生素甲萘醌-7的方法，該方法包括以下步驟：

1）將納豆菌發(fā)酵液噴霧干燥，用溶劑提取或浸溶納豆菌發(fā)酵液噴干粉，獲得浸溶液，所述納豆菌為納豆枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis?natto）ST188，保藏號(hào)為:CGMCC?No.8400；

2）將步驟1）獲得的浸溶液濃縮得到浸膏；

3）將步驟2）獲得的浸膏通過柱層析，并進(jìn)行梯度或等度洗脫，將收集液濃縮，得到甲萘醌-7粗品；

4）將步驟3）得到的甲萘醌-7粗品結(jié)晶提純，即得所述維生素甲萘醌-7純品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，在步驟1）中，將納豆菌發(fā)酵液噴霧干燥前，向所述納豆菌發(fā)酵液中添加0.1-1重量%的大豆油。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，在步驟3）中，所述柱層析的方法包括：首先將步驟2）獲得的所述浸膏以濕法上柱脫色，并以第一淋洗劑洗脫；然后將脫色后的產(chǎn)物以濕法干法混合上柱方式進(jìn)行純化，即先以濕法裝柱，再將脫色后的產(chǎn)物以干法裝柱的方式裝填于濕法裝柱的上層，并以第二淋洗劑洗脫，其中濕法干法混合上柱的柱中，所述濕法裝柱與所述干法裝柱的體積比為1∶0.2-2。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，在步驟1）中，所述提取或浸溶條件包括：將納豆菌發(fā)酵液噴干粉與溶劑按1∶3-8的質(zhì)量比混合，在15-40℃的溫度下，以20-60rpm攪拌速率攪拌20-40min，固液分離，所得清液即為浸溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的方法，其中，在步驟1）中，所述溶劑選自甲醇、石油醚、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷、異丙醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯和75-100體積%乙醇中的一種或多種。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的方法，其中，在步驟2）以及步驟3）中，所述濃縮為減壓濃縮，所述減壓濃縮的條件包括：溫度為40-95℃，真空度小于3000Pa。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中，將步驟2）獲得的所述浸膏以濕法上柱脫色包括：將硅膠和石油醚按1∶1.5-2質(zhì)量比混勻后裝柱，再將步驟2）獲得的浸膏和石油醚按1∶0.5-1質(zhì)量比混勻后上柱。

8.根據(jù)權(quán)利要求3或7所述的方法，其中，所述第一淋洗劑為非極性溶劑，優(yōu)選為石油醚、正己烷和環(huán)己烷中的一種或多種；所述第一淋洗劑的用量為層析柱體積的2-3倍。

9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中，將脫色后的產(chǎn)物以濕法干法混合上柱方式進(jìn)行純化包括：先將硅膠和石油醚以1∶1.5-2的質(zhì)量比混勻后裝柱；再將所述脫色后的產(chǎn)物與硅膠和石油醚以1∶3-4：4-5的質(zhì)量比混合、陰干后裝填在先以濕法裝填的柱中。

10.根據(jù)權(quán)利要求3或9所述的方法，其中，所述第二淋洗劑選自石油醚、體積比為1∶9的二氯甲烷和石油醚的混合物或者體積比為1∶9的三氯甲烷和石油醚的混合物，其中，所述石油醚的用量為層析柱體積的10-15倍，所述體積比為1∶9的二氯甲烷和石油醚的混合物的用量為層析柱體積的4-5倍，所述體積比為1∶9的三氯甲烷和石油醚的混合物的用量為層析柱體積的4-5倍。

11.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述納豆菌發(fā)酵液為將所述納豆枯草芽孢桿菌ST188接種在含有10-50g/1000mL黃豆粉和5-45g/1000mL蔗糖的培養(yǎng)基中，在30-40℃，經(jīng)過20-48小時(shí)發(fā)酵獲得納豆菌發(fā)酵液，其中所述納豆枯草芽孢桿菌ST188的接種濃度為5-20%。

12.一種納豆枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis?natto）ST188，保藏號(hào)為:CGMCC?No.8400。