[發明專利]以電化學發光生物傳感器檢測DNA甲基轉移酶的方法及應用

有效

• 申請號: 201410128514.5
• 申請日: 2014-03-31
• 公開（公告）號: CN103901020A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 李延;閆曌
• 申請（專利權）人: 西北大學
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N21/69
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明涉及電化學發光生物傳感器，具體涉及一種以電化學發光生物傳感器檢測DNA甲基轉移酶的方法及應用。?

背景技術

DNA甲基化在許多生物過程中有重要的作用，包括轉錄，基因組印記，細胞分化，染色質結構和胚胎形成。研究發現許多人類的疾病與異常基因甲基化有關。DNA甲基化是指生物體在DNA甲基轉移酶（DNA?methyltransferase，DNA?MTase）的催化下，以S-腺苷甲硫氨酸（SAM）為甲基供體，將甲基轉移到特定的堿基上的過程。DNA甲基化可以發生在GATC和CCA/TGG上，即腺嘌呤的N-6位、胞嘧啶的N-4位、鳥嘌呤的N-7位或胞嘧啶的C-5位。這種異常的DNA甲基轉移酶的活性與癌癥的發病機制有關，這種關系提供了一個在疾病的診斷和治療的潛在目標。此外，DNA?MTase是用于治療癌癥的藥理學家族的新成員。因此，一種靈敏、快速的檢測DNA甲基化及DNA?MTase活性的方法無疑對癌癥的早期診斷提供了強有力的手段，為研究基因調控的基本機制提供了見解，同時為研發新的抗癌藥物提供了依據。用于DNA甲基化轉移酶活性的測定的傳統的方法依賴放射性同位素標記的基底，基于PCR的不同技術，毛細管電泳和高效液相色譜。這些方法時間密集，耗費DNA，需要費力的處理和特殊的同位素標記。?

電化學發光(電致化學發光)，簡稱ECL,是通過電極對含有化學發光物質的體系施加一定的電壓或通過一定的電流，電極氧化還原產物之間或電極氧化還原產物與體系其它共存物質之間發生化學反應并生成某種不穩定的中間態物質，該物質分解而產生的化學發光現?象。電化學發光技術是電化學與化學發光相結合的檢測技術，該技術既集成了發光與電化學分析技術的優點，又具有二者結合產生的可控性、選擇性、重現性好、靈敏度高、檢測限低及動力學響應范圍寬等新優勢。?

發明內容

針對測定DNA甲基轉移酶的現有技術靈敏度不高、測定方法復雜等缺陷，本發明旨在提供一種以電化學發光生物傳感器檢測DNA甲基轉移酶的方法及應用。?

申請人擬設計含有甲基化特定位點的發夾DNA捕獲探針，利用限制性內切酶對識別位點甲基化敏感的特性，以不同的甲基轉移酶為例，建立快速甲基轉移酶活性的分析方法。同時，用此方法考察不同抗癌藥物對于甲基化轉移酶活性的影響，建立了一種在分子水平進行藥物篩選的新思路。本發明充分利用了核酸甲基化轉移酶、限制性內切酶和核酸分子探針的性質和功能，進一步發展了核酸分子技術在DNA-蛋白質（酶）相互作用研究中的應用，為研究生命活動過程提供了新的手段和方法。?