[發明專利]分離純化GABA受體的親和層析介質及其制備方法

有效

• 申請號: 201410125851.9
• 申請日: 2014-04-01
• 公開（公告）號: CN104971700B
• 公開（公告）日: 2017-08-11
• 發明（設計）人: 任天瑞;于廣金;張雷;張博;龐文文
• 申請（專利權）人: 上海師范大學
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于分離純化GABA受體的親和層析介質的制備方法，具體包括如下步驟：1）將氟蟲腈進行化學修飾作為親和配基；2）以瓊脂糖凝膠為基質，經環氧活化劑活化后，偶聯親和配基，得親和層析介質；3）將親和層析介質裝柱，用于分離純化GABA受體蛋白；

所述的對氟蟲腈進行化學修飾，是將氟蟲腈與溴乙酰溴進行化學反應，得到產物A；將產物A與鄰苯二甲酰亞胺鉀鹽在無水DMF中反應，得產物B；將產物B用85%的水合肼進行肼解，得到粗產物C，將粗產物C過硅膠柱，得純品C。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述的氟蟲腈與溴乙酰溴的摩爾比為1：1~5；產物A與鄰苯二甲酰亞胺鉀鹽的摩爾比為1：1~10；產物B與85%的水合肼的摩爾比為1：1~3。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述的瓊脂糖凝膠為選自瓊脂糖6FF、瓊脂糖4FF、瓊脂糖CL-6B、瓊脂糖CL-4B、瓊脂糖6B、瓊脂糖4B中的一種或多種。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述的環氧活化劑為環氧氯丙烷、環氧溴丙烷、乙二醇雙縮水甘油醚或1,4-丁二醇-二縮水甘油醚。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：將步驟1）中所得化學修飾的氟蟲腈即純品C與環氧活化的瓊脂糖凝膠進行偶聯，其中環氧活化的瓊脂糖凝膠與純品C的質量比為10~1:1~5，在25~40℃水浴中振蕩8~24 h。

6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述的將親和層析介質裝柱，用于分離純化GABA受體蛋白包括以下步驟：

1）魚腦GABA受體粗提物提取并濃縮；

2）利用氟蟲腈親和層析介質孵育步驟1）中得到的樣品；

3）洗脫步驟2）中親和層析介質吸附的GABA受體蛋白；所述的洗脫條件為含Triton X-100和氟西泮的pH 7.5的磷酸緩沖液。

7.如權利要求6所述的制備方法，其特征在于，還包括使用超濾、離子交換層析進一步純化步驟3）中所洗脫的分離純化GABA受體蛋白。