[發明專利]一種促進豬體細胞克隆胚胎體外發育的培養液

有效

• 申請號: 201410122806.8
• 申請日: 2014-03-28
• 公開（公告）號: CN103952368A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發明（設計）人: 張運海;張宇;陶佳;吳蓉花;劉星;李運生;章孝榮
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 廣州三環專利代理有限公司 44202
• 代理人: 劉孟斌

［技術領域］

本發明涉及動物胚胎培養液，特別涉及一種促進豬體細胞克隆胚胎體外發育的培養液。?

［背景技術］

動物的體細胞克隆，是指利用一定的設備和技術手段，將動物的體細胞與已經去除細胞核遺傳物質的卵母細胞進行體外重組即體細胞核移植，接著再將克隆胚胎體外培養至特定的發育時期后，然后移植到生理狀態相同的代孕母體的子宮內，完成發育，生產與體細胞供核體遺傳上同質后代的過程。十幾年來，體細胞克隆技術結合分子生物學和細胞培養技術生產了大量的基因修飾后代，包括外源基因的隨機整合和基因定點插入、敲除的動物。借助體細胞克隆生產轉基因動物，獲得了遠比原核注射高的效率，這在動物育種、拯救瀕危動物乃至醫學基礎與臨床研究方面具有廣泛的應用價值，例如為人類器官移植開辟異源供體(L.X.Lai?et?al.,Production?of?alpha-1,3-galactosyltransferase?knockout?pigs?by?nuclear?transfer?coning,Science,295(2002)1089-1092.)、制備人類疾病醫學動物模型以及生物學基礎研究等提供了一個比較理想的平臺。通過體細胞克隆技術還成功建立了來自克隆胚胎的小鼠、大鼠、人胚胎干細胞系，為治療性克隆打下了堅實的基礎。?

體細胞克隆胚胎的體外培養是克隆動物體外生產十分重要的環節，這一步將直接關系到克隆胚胎生產的效率和質量、重構程序的優化以及早期胚胎移植?等問題。為了確保體外培養的效果，實驗室中所使用的培養液的成分和培養的環境（包括溫度、氣體濃度和濕度等），都是盡量模擬母體生殖道的內環境。但是由于畢竟是模擬的，所以動物胚胎的體外培養體系仍不能完全模仿母體生殖道的內環境，因此胚胎體外的培養效果與體內胚的發育效果仍然有一定的差距。母體生殖道內的液體成分較為復雜，含有大量的激素和生長因子，且這些成分并非恒定的，或多或少對胚胎的后期發育有積極地調控作用，而實驗室常用的培養液成分相對單一、固定，無法充分模擬母體生殖道內的液體成分，這也解釋了為什么動物的克隆效率比較低的部分原因。因此，實驗室內常用的培養液還需通過添加或者調節生長因子、激素等，使其能夠達到最佳的模擬狀態，從而使胚胎的體外培養體系進一步完善，在實驗室內可以得到足夠多的優質胚胎，為該動物的后期實驗研究提供好的素材。?