[發(fā)明專利]一種利用豬血制備亞硝基血紅蛋白的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410122785.X
• 申請(qǐng)日: 2014-03-28
• 公開（公告）號(hào): CN104945503A
• 公開（公告）日: 2015-09-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 程燕;李煜;符紹輝;程榆茗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津?qū)毜限r(nóng)業(yè)科技股份有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/805
• 分類號(hào): C07K14/805
• 代理公司: 天津盛理知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12209
• 代理人: 董一寧

1.一種利用豬血制備亞硝基血紅蛋白的方法，其特征在于：包括如下步驟：

①?gòu)男迈r豬血中分離出血細(xì)胞；

②從血細(xì)胞只能怪提取出血紅蛋白粗提液；

③純化血紅蛋白，并測(cè)定其純度：在步驟②中得到的血紅蛋白粗提液中加入抗氧化劑真空脫氣，并通入N₂保護(hù)，于60℃水浴加熱30min使雜蛋白沉淀，然后離心取上清液；純化后的血紅蛋白溶液加入10mg/ml甘油后置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫蛔詈笤贉y(cè)定血紅蛋白含量；

④合成亞硝基血紅蛋白：在純化后的血紅蛋白中加入NaOH，同時(shí)加入亞硝酸鈉、維生素C，調(diào)節(jié)pH為酸性，加熱至50-70℃保持25-45min，真空冷凍干燥后生成紅色粉狀物即為亞硝基血紅蛋白。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用豬血制備亞硝基血紅蛋白的方法，其特征在于：上述步驟②的具體方法是：加入血紅蛋白體積1.5倍的蒸餾水，混合均勻后電磁攪拌30min；當(dāng)溶液由暗紅轉(zhuǎn)為鮮紅時(shí)，將溶液以3000r／min離心15min，棄去沉淀，得血紅蛋白粗提液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用豬血制備亞硝基血紅蛋白的方法，其特征在于：上述步驟③測(cè)定血紅蛋白含量的方法是：

①AHD-575試劑的配制：準(zhǔn)確稱取聚乙二醇辛基苯基醚25.0g，加入0.1mol/LNaOH溶液定容至1L，過濾，室溫下保存?zhèn)溆茫?/p>

②標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：將豬血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)品配制成不同濃度的溶液，分別吸取0.1ml加入到30mLAHD-575試劑中，靜置反應(yīng)5min，于575m波長(zhǎng)下，以AHD-575試劑為空白，測(cè)定吸光度；以豬血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的濃度(g/L)為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，得出血紅蛋白溶液濃度X與吸光度值Y的關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)線及回歸方程；

③于潔凈的燒杯中，吸取血紅蛋白提取液樣品0.1ml，以AHD-575的方法測(cè)定吸光度A575，查標(biāo)準(zhǔn)曲線求得血紅蛋白含量(g/L)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用豬血制備亞硝基血紅蛋白的方法，其特征在于：上述步驟④血紅蛋白：亞硝酸鈉：維生素C按照摩爾比=1:1～3:4～8的比例配制。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用豬血制備亞硝基血紅蛋白的方法，其特征在于：上述步驟④中調(diào)節(jié)pH為5.0～6.0。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用豬血制備亞硝基血紅蛋白的方法，其特征在于：上述步驟④中加入0.5gNaOH。