[發(fā)明專利]一種定量檢測C肽的膠乳增強免疫比濁試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410122739.X
• 申請日: 2014-03-28
• 公開（公告）號: CN103852584A
• 公開（公告）日: 2014-06-11
• 發(fā)明（設計）人: 李民友;吉權
• 申請（專利權）人: 重慶中元生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 重慶博凱知識產權代理有限公司 50212
• 代理人: 李明;張先蕓

技術領域

本發(fā)明屬于體外診斷試劑領域，具體涉及一種采用膠乳增強免疫比濁法定量測定檢測標本中C肽含量的試劑盒。

背景技術

C肽（C-Peptide）又稱連接肽，由31個氨基酸組成，分子量為3020道爾頓，是胰島素原中連接胰島素A鏈和B鏈的一段短肽，其作用在于促進胰島素分子在β細胞內質網(wǎng)中合成，并使胰島素進行有效折疊和裝配。臨床上對于C肽的測定主要用來正確評價胰島β細胞功能變化及發(fā)展規(guī)律，以及對糖尿病類型的準確判斷和病情監(jiān)控。

人體胰島β細胞合成胰島素原，隨后胰島素原被等摩爾地切割成胰島素和C肽。因此，胰島β細胞分泌的胰島素和C肽呈等分子關系，血中C肽濃度可間接反應胰島素濃度。而與胰島素相比，C肽在體內不被肝臟分解，只能通過腎臟清除，且半衰期較長（C肽的半衰期大于30min，胰島素的半衰期為3～4min），在血清中的濃度幾乎是胰島素的10倍，因此C肽水平更能準確反映胰腺中β細胞的分泌功能。

此外，人源和動物源以及各種改進的胰島素在氨基酸序列和結構上類似，導致了它們的免疫原性相近，在檢測中不易區(qū)分。如果通過檢測血中的胰島素水平來評價胰島功能，容易受到外源性胰島素的影響，而外源性胰島素中不含有C肽，且C肽不受胰島素治療中產生的胰島素自身抗體的干擾，因此，測定C肽對內源性胰島素的分泌能力評價更具有臨床意義。盡管測量C肽的抗體容易與胰島素原發(fā)生交叉反應，但是胰島素原一般不會出現(xiàn)在血中，游離C肽的含量大概占總C肽含量的90%以上，所以臨床上一般通過直接測定血清總C肽的含量來對β細胞進行評價。

目前，臨床上對C肽的測定方法主要包括放射免疫法（Radioimmunoassay，RIA）、酶聯(lián)免疫吸附測定法（Enzyme-Linked，Immunosorbent?Assay，ELISA）及化學發(fā)光法等，其中RIA法雖然靈敏度高，但對設備要求較高、檢測結果不穩(wěn)定且存在放射性污染；ELISA定量準確性差，操作時間長，自動化程度低，無法滿足臨床上大量、快速檢測的需求；化學發(fā)光法則存在儀器維護昂貴，易受干擾，重復性差的缺點。

發(fā)明內容

針對現(xiàn)有技術存在的上述不足，本發(fā)明要解決的技術問題是：提供一種穩(wěn)定性好，測試效率高，測試結果準確，靈敏度高的定量檢測C肽的膠乳增強免疫比濁試劑盒。

為了解決上述技術問題，本發(fā)明采用如下技術方案：

一種定量檢測C肽的膠乳增強免疫比濁試劑盒，其特征在于，包括C肽R1試劑、C肽R2試劑和C肽校準品；

所述C肽R1試劑由緩沖液、保護劑Ⅰ、反應增強劑和防腐劑得到；

所述C肽R2試劑由緩沖液、保護劑Ⅰ、防腐劑和包被抗人C肽抗體的致敏聚苯乙烯膠乳顆粒得到；其中包被抗人C肽抗體的致敏聚苯乙烯膠乳顆粒由抗人C肽抗體和聚苯乙烯膠乳顆粒偶聯(lián)得到；所述抗人C肽抗體為鼠源抗人C肽抗體、兔源抗人C肽抗體或者羊源抗人C肽抗體；

所述C肽校準品由緩沖液、保護劑Ⅱ、防腐劑和C肽重組蛋白得到。

上述技術方案中，將抗人C肽抗體以定向化學偶聯(lián)的方式連接在聚苯乙烯膠乳顆粒表面，當檢測標本中的C肽抗原與試劑盒中的抗人C肽抗體發(fā)生免疫反應后形成聚集顆粒而產生濁度，通過在400～700nm波長下測定其濁度即可計算出檢測標本中的C肽含量。

上述技術方案中，C肽R2試劑中包被抗人C肽抗體的致敏聚苯乙烯膠乳顆粒由抗人C肽抗體和聚苯乙烯膠乳顆粒偶聯(lián)得到，其中抗體與聚苯乙烯膠乳顆粒的重量比可以為0.5～20：100，抗人C肽抗體為鼠源抗人C肽抗體、兔源抗人C肽抗體或者羊源抗人C肽抗體，其可以和檢測樣本中的抗原發(fā)生免疫反應；優(yōu)選鼠源抗人C肽抗體，這是因為其免疫原性、抗原結合親和力、血清半衰期更為理想，與血清中的C肽特異性結合能力高，可以大大提高檢測的準確性。

作為優(yōu)化，所述緩沖液為PBS緩沖液、Tris-HCl緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液和檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或者幾種；

其中C肽R1試劑中緩沖液的濃度為20～200mM；C肽R2試劑中緩沖液的濃度為20～200mM；C肽校準品中緩沖液的濃度為20～200mM。