[發(fā)明專利]一種在食管鱗癌中顯著下調(diào)的長(zhǎng)鏈非編碼RNA的檢測(cè)及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410122733.2
• 申請(qǐng)日: 2014-03-27
• 公開（公告）號(hào): CN103952478A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹秀峰;李蘇卿;史衛(wèi)紅;仝宇梭;庹磊;汪春梅;謝海偉;劉子豪;楊同昕;呂進(jìn);紀(jì)律;朱斌;王和明;李義生
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京市第一醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種長(zhǎng)鏈非編碼RNA在制備用于食管癌輔助診斷或者療效預(yù)測(cè)試劑中的應(yīng)用。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述食管癌為食管鱗狀細(xì)胞癌。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述長(zhǎng)鏈非編碼RNA序列如序列表中SEQ?ID?NO.1所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的用于食管癌輔助診斷或者療效預(yù)測(cè)的試劑為實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)試劑。

5.一種用于食管癌輔助診斷或者療效預(yù)測(cè)的實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括根據(jù)核苷酸序列為SEQ?ID?NO.1的長(zhǎng)鏈非編碼RNA設(shè)計(jì)并合成出特異性用于實(shí)時(shí)定量PCR的檢測(cè)引物。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，用于長(zhǎng)鏈非編碼RNA實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)的特異性引物如序列表中SEQ?ID?NO.4和SEQ?ID?NO.5所示。

7.一種長(zhǎng)鏈非編碼RNA的檢測(cè)方法，包括樣品RNA的提取、樣品cDNA的制備、lncRNA的擴(kuò)增。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的樣品RNA的提取、樣品cDNA的制備、lncRNA的擴(kuò)增的具體步驟包括：

1)樣品總RNA的提取：按照Life?Technologies公司的試劑所需試劑及步驟提取食管鱗狀細(xì)胞癌組織或腫瘤的Total?RNA；再用NanoDrop?ND-1000核酸定量?jī)x定量(NanoDrop?Technologies，Wilmington，Delaware)定量所提取的RNA的純度和濃度，甲醛變性膠電泳質(zhì)檢確保提取的RNA的完整性。

2)樣品cDNA的制備：采用TaKaRa試劑盒PrimeScript^TM?RT?reagent?Kit?with?gDNA?Eraser(Perfect?Real?Time)(貨號(hào)RR047A)對(duì)提取的總RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA；該試劑盒內(nèi)含RNase-Free?DNase，可有效去除混雜的基因組DNA。

3)lncRNA的擴(kuò)增：采用TAKARA?SYBR?Premix?Ex?Taq^TM?II(TIi?RNaseH?Plus)熒光定量試劑盒，以反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增。