[發(fā)明專利]一種抗病毒化合物在制備抗HIV-1病毒藥物中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410120259.X
• 申請日: 2014-03-28
• 公開（公告）號: CN103893172A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張輝;柏川;潘婷
• 申請（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)
• 主分類號: A61K31/423
• 分類號: A61K31/423;A61K31/428;A61P31/18
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 任重

技術(shù)領(lǐng)域

????本發(fā)明涉及一種新的化合物，更具體地，涉及一種抗病毒化合物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

????HIV-1病毒最初發(fā)現(xiàn)于1981年在美國發(fā)現(xiàn)，由一系列不明原因的，以細(xì)胞免疫缺陷為特征的綜合征出現(xiàn)以后，研究人員開始了對其致病源的尋找。1983年法國研究小組從一淋巴腫大綜合征病人的淋巴結(jié)中，分離出HIV-1病毒。它是一種感染人類免疫系統(tǒng)細(xì)胞的慢病毒，該病毒破壞人體的免疫力，導(dǎo)致免疫系統(tǒng)失去抵抗力，而導(dǎo)致各種疾病以及癌癥得以在人體內(nèi)生存，從而導(dǎo)致獲得性免疫缺陷綜合癥——艾滋病。目前，由于對艾滋病教育的普及不充分，全球的HIV感染仍呈上升趨勢，尤其在中國更是進(jìn)入了快速增長期。盡快阻止艾滋病在我國的流行已成了一件刻不容緩的大事。因此，繼續(xù)擴(kuò)大我們對HIV-1致病機(jī)制的認(rèn)識，開發(fā)出更有效，更經(jīng)濟(jì)，更少副作用的抗病毒藥物以完全清除殘余的HIV-1復(fù)制，以及開發(fā)出強(qiáng)有力而又長效的抗HIV-1的疫苗以保護(hù)易感人群，仍將是我們能否最終戰(zhàn)勝艾滋病的關(guān)鍵。

發(fā)明內(nèi)容

????本發(fā)明提供一種抗病毒化合物在制備抗HIV-1病毒藥物中的應(yīng)用，所述的抗病毒化合物的結(jié)構(gòu)式如式I所示：

??????????????????????????????????????????????????????（式I）

??????X為O或S。

????所述的抗病毒化合物包括式I所述的化合物的可接受的藥用鹽。

????所述的藥用鹽為鈉鹽、鉀鹽或鈣鹽。

????本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：

????運(yùn)用HIV-1?Vif蛋白可以通過泛素化降解A3G蛋白的功能特性，證實(shí)上述通式的抗病毒化合物能夠抑制Vif蛋白降解A3G的活性，導(dǎo)致篩選系統(tǒng)中綠色熒光蛋白的表達(dá)量將回升。通過在人的原代CD4+?T淋巴細(xì)胞以及H9、SupT?1等CD4+?T淋巴細(xì)胞系中進(jìn)行野生型HIV-1病毒的感染實(shí)驗(yàn)證實(shí)，他們均具有較好的抗病毒作用，為進(jìn)一步的抗病毒藥物研發(fā)提供的強(qiáng)有力的理論基礎(chǔ)和實(shí)踐基礎(chǔ)，具有重要的研發(fā)價值和開發(fā)意義。

附圖說明

圖1為細(xì)胞篩選模型的構(gòu)建原理。

圖2為細(xì)胞篩選模型的構(gòu)建原理。

圖3：?抗病毒化合物具有抑制Vif活性的作用。

圖4：抗病毒化合物在表達(dá)A3G蛋白的H9細(xì)胞和不表達(dá)A3G蛋白的SupT1細(xì)胞中抑制野生型HIV-1的復(fù)制效果。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明。除非特別說明，本發(fā)明采用的試劑、設(shè)備和方法為本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)市購的試劑、設(shè)備和常規(guī)使用的方法。

實(shí)施例1

Vif是HIV的必需蛋白之一，其主要功能是拮抗宿主中天然的抗病毒因子APOBEC3G。APOBEC3G是H?IV-1病毒的一大威脅，它存在于HIV-1天然的宿主細(xì)胞（如CD4+?T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞）中，能被包裹入HIV-1病毒顆粒，在HIV-1逆轉(zhuǎn)錄過程中發(fā)揮其極強(qiáng)的抗病毒作用。為此，?HIV-1自身編碼了Vif蛋白來特異性對抗APOBEC3G的抗病毒活性，它可將APOBEC3G導(dǎo)入泛素系統(tǒng)并將其降解（圖1）。因此，如何滅活Vif，是研發(fā)抗HIV-1病毒藥物的一個十分重要的靶標(biāo)。

根據(jù)Vif拮抗APOBEC3G的分子機(jī)理，篩選出若干可讓HIV的Vif無法降解?APOBEC3G的小分子藥物。為此我們將建立一種簡便的活細(xì)胞篩選系統(tǒng)，如圖2所示，將表達(dá)APOBEC3G-GFP融合蛋白和表達(dá)Vif的?質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。以APOBEC3G-GFP融合蛋白是否被降解為指標(biāo)。只要某種化合物在Vif存在的情況下還能使APOBEC3G-GFP融合蛋白不被降解（即GFP熒光還在），該化合物就是Vif的抑制劑。通過對Vif靶標(biāo)的進(jìn)一步鑒定，確認(rèn)化合物是作用于宿主細(xì)胞還是作用在病毒蛋白的Vif上。

?圖1將表達(dá)?HIV?Vif?蛋白?的質(zhì)粒和表達(dá)?APOBEC3G（A3G）-GFP?融合蛋白的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞，VIF蛋白會結(jié)合A3G-GFP,?同時結(jié)合由Cul5、EloB和EloC構(gòu)成的蛋白質(zhì)復(fù)合體E3。E3是一個泛素化酶，會在A3G-GFP蛋白上打上泛素標(biāo)簽，從而介導(dǎo)A3G-GFP進(jìn)入蛋白酶體發(fā)生降解，導(dǎo)致觀察不到綠色熒光。

圖2?當(dāng)加入待篩的化合物庫后,庫中的某種化合物抑制了?Vif?的功能，A3G-GFP?融合蛋白能正常表達(dá)，可觀察到明顯的綠色熒光，該種化合物就是Vif抑制劑，可進(jìn)一步開發(fā)成為有抗病毒活性的先導(dǎo)化合物。