[發明專利]一種在細胞膜微囊中高效裝載藥物的方法

無效

• 申請號: 201410117807.3
• 申請日: 2014-03-27
• 公開（公告）號: CN103920161A
• 公開（公告）日: 2014-07-16
• 發明（設計）人: 毛崢偉;張元洪
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A61K47/46
• 分類號: A61K47/46;A61K47/26;A61K47/02
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 韓介梅

技術領域

本發明涉及一種在細胞膜微囊中高效裝載藥物的方法。尤其是利用洋地黃皂苷提高細胞膜通透性，并在裝載藥物后使用鈣離子封閉細胞膜的方法。

背景技術

藥物在載體中的高效裝載和可控釋放是實現藥物有效利用、降低毒性的重要前提。藥物在載體中的裝載可實現對藥物的保護，提高其穩定性；同時可調控藥物的釋放速度和釋放位置，降低其對健康細胞和組織的毒性。

通常的藥物載體主要是使用人工合成的聚合物或天然來源的蛋白質和多糖作為原料，其結構比較簡單。但是往往生物相容性差，較易被人體的免疫系統識別并清除，具有體內循環時間短且不易到達病變部位的缺點，這些缺點限制了其推廣與應用。

仿細胞微囊是由細胞膜將囊內空間與囊外空間隔離開來形成的球狀物質。利用細胞松弛素b處理哺乳動物細胞，破壞維持細胞形態的肌動蛋白的組裝，然后在機械剪切的作用下制備仿細胞微囊。

仿細胞微囊作為癌細胞靶向性的藥物載體有諸多優點：一方面是由于微囊表面實質是一層類細胞膜結構，因此具有極佳的生物相容性，并且有望降低自體免疫系統的清除作用，具有更好的臨床應用價值。但是，細胞膜微囊也存在著囊壁通透性差、只能負載特定分子的缺點。洋地黃皂苷是一種表面活性劑，可以提高細胞膜的通透性，使得一些分子量較大的藥物分子也可以進入細胞膜微囊內部；同時洋地黃皂苷可以與高濃度的鈣離子結合，實現細胞膜的再次封閉。這一方法可大大提高細胞膜微囊的藥物裝載量同時也拓展了可負載藥物分子的種類。

發明內容

本發明的目的是提供一種在細胞膜微囊中高效裝載藥物的方法。

本發明的在細胞膜微囊中高效裝載藥物的方法，包括以下步驟：

1）在培養有人血管內皮細胞的培養盤中加入20μL?濃度為1mg/mL的細胞松弛素b溶液，37℃下孵育30min；磷酸鹽緩沖液洗數次，胰酶消化收集細胞和細胞膜微囊，離心分離得到細胞膜微囊懸液；

2）取200?μg步驟1）所得的細胞膜微囊加入到1mL洋地黃皂苷與藥物的混合溶液中，洋地黃皂苷與藥物的濃度分別為10μg/mL和200μg/mL，37℃孵育1～24h；

3）在步驟2）的溶液中加入10μL?0.5mol/mL氯化鈣溶液，37℃?下孵育2h；離心收集微囊，洗滌，得到裝載藥物的細胞膜微囊。

本發明中，所說的藥物可以是鹽酸阿霉素、釓噴酸葡胺或葡聚糖。

本發明的原理：使用洋地黃皂苷提高細胞膜通透性，利用濃度差將藥物裝入細胞膜微囊，隨后使用氯化鈣溶液封閉細胞膜。

本發明的有益效果在于：

本發明工藝過程簡單，制備速度快，可控性好，材料來源于天然細胞，具有優越的生物相容性和傳遞性能；洋地黃皂苷的引入，可暫時增加細胞膜微囊的通透性，實現多種藥物分子的包埋，并調控其包埋量，有望作為多功能藥物載體。

附圖說明

圖1?是標記有細胞膜紅色熒光探針DiI的細胞膜微囊的熒光照片。

圖?2?是實施例1所得的細胞膜微囊中的鹽酸阿霉素濃度和孵育時間的關系。

圖3?是實施例2所得的細胞膜微囊中的釓噴酸葡胺濃度和孵育時間的關系。

圖4?是實施例3所得的細胞膜微囊中的葡聚糖濃度和孵育時間的關系。

具體實施方式

以下結合實例進一步說明本發明，但這些實例并不用來限制本發明。

實施例1

1）在培養有人血管內皮細胞的培養盤中加入20?μL?細胞松弛素b溶液（濃度為1mg/mL）,37℃下孵育30min后用磷酸鹽緩沖液洗三次，胰酶消化，離心收集細胞；渦旋處理所得細胞1min；離心收集所得上清液即為細胞膜微囊懸液。

將200μg上述所得的細胞膜微囊分散在1mL磷酸鹽緩沖液中；向其中加入10μL1mg/mL的細胞膜紅色染料DiI，使其混合均勻，孵育15min；將所得細胞膜微囊離心洗滌數次以去除未標記上的染料；分散在磷酸鹽緩沖液中的細胞膜微囊的熒光照片見圖1。

2）取200?μg步驟1）所得的細胞膜微囊加入到洋地黃皂苷與鹽酸阿霉素的混合溶液中，使洋地黃皂苷與鹽酸阿霉素的濃度分別為10μg/mL和200μg/mL，37℃孵育1~24h；加入氯化鈣溶液，使鈣離子濃度為5mM，37℃?下孵育2h；離心磷酸鹽緩沖液洗數次，得到裝載鹽酸阿霉素的細胞膜微囊。根據紫外光譜圖中543nm處的吸光度得到不同孵育時間下該微囊中的藥物濃度為2.8、6.5、9.3、20.1、28.9μg/mL，見圖2。

實施例2