[發明專利]利用玉米秸稈酶解液制備促進牡丹生長并拮抗病原菌的菌劑的方法

有效

• 申請號: 201410116401.3
• 申請日: 2014-03-26
• 公開（公告）號: CN104068063A
• 公開（公告）日: 2014-10-01
• 發明（設計）人: 韓繼剛;王云山;蔣克謙;王永強
• 申請（專利權）人: 上海禾頤農業技術有限公司
• 主分類號: A01N63/00
• 分類號: A01N63/00;A01P3/00;A01P21/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及利用玉米秸稈酶解液制備促進牡丹生長并拮抗病原菌的菌劑的方法。背景技術

牡丹歸芍藥科（Paeoniaceae）、芍藥屬（Paeonia），一直以來都是中國最重要的觀賞植物和藥用植物之一，已有1600多年的歷史。目前，牡丹在國內的主要栽培地點為荷澤、洛陽、北京、臨夏、天彭、銅陵等。近年來，牡丹的油用價值日漸凸顯，油用牡丹的發展呈現出快速擴張的態勢。對于觀賞牡丹來講，一個突出的問題是，由于不同地區氣候環境和土壤性質的差異造成的土壤微生態活性降低，是引種地區栽培牡丹生長狀況不良、觀賞性狀下降的重要原因之一。而對于油用牡丹，如何科學施肥并顯著提高牡丹籽的產量則是非常迫切的問題。在牡丹的栽培過程中，還面臨著一些真菌病害的威脅，主要有灰霉病（Botrytis?paeoniae）、紅斑病（Cladosporium?aeoniae）和褐斑病（Cercospora?paeoniae）等。因此，研制促進牡丹生長并拮抗病原菌的微生物菌劑具有顯著和迫切的現實意義。其中，篩選對牡丹兼具促生和拮抗病原菌功能的植物促生細菌菌種資源是限制微生物菌劑發展的重要瓶頸因素。

目前大多數菌劑的發酵都采用淀粉質原料，但我國耕地資源緊張，糧食生產壓力巨大，難以支撐龐大發酵工業的可持續發展。因此，需要尋找更豐富的可再生資源作為生產原料以用于菌劑的生產。

發明內容

本發明所要解決的一個技術問題是提供一種縮短生產周期并且菌體含量達到淀粉質原料生產水平的制備促進牡丹生長并拮抗病原菌的菌劑的方法。

本發明所提供的制備促進牡丹生長并拮抗病原菌的菌劑的方法，包括：

(1)將玉米秸稈在180-200℃（如180℃或200℃）和1.0-2.0Mpa（如1.0Mpa或2.0Mpa）條件下進行水熱處理，得到經過預處理的玉米秸稈；

(2)將所述經過預處理的玉米秸稈粉碎后，用纖維素酶進行酶解，分別收集酶解液和酶解殘渣；

（3）用所述酶解液、(NH₄)₂SO₄、MgSO₄、CaCO₃、玉米漿和水配制發酵培養基，每升所述發酵培養基中所述酶解液的含量滿足每升所述發酵培養基的葡萄糖含量為20-50g（如20g）；

(4)向所述發酵培養基中接入促進牡丹生長并拮抗病原菌的細菌進行發酵，發酵結束后收集發酵液，將所述發酵液和所述酶解殘渣混合，得到促進牡丹生長并拮抗病原菌的菌劑。

上述方法中，所述（1）中，所述水熱處理時間可為10-20min（如10min或20min）。

上述方法中，所述(2)可為將所述經過預處理的玉米秸稈粉碎后，按以干重計每克秸稈加入10-15FPU（纖維素酶活單位）（如15FPU）的比例加入纖維素酶，在55-80℃（如55℃）、pH為4.8-5.0的條件下在水中酶解24-48h（如48h），得到玉米秸稈酶解物，將所述玉米秸稈酶解物進行離心，分別收集上清液和沉淀，所述上清液即為所述酶解液，所述沉淀即為所述酶解殘渣。

上述方法中，所述（3）中，每升所述發酵培養基中，(NH₄)₂SO₄的含量為10g，MgSO₄的含量為0.4g、CaCO₃的含量為6g、玉米漿的含量為2g。

上述方法中，所述（4）中，所述發酵液和所述酶解殘渣可按照1:1的質量比進行混合。

上述方法中，所述（2）中，所述粉碎是將所述經過預處理的玉米秸稈粉碎至50-100目。

上述方法中，所述促進牡丹生長并拮抗病原菌的細菌為多粘類芽孢桿菌（Paenibacillus?polymyxa）CSM1101，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為CGMCC?No.8527。

上述方法中，所述(4)在30℃培養18-30小時（如24-30小時）進行發酵。在本發明的一個實施方式中，在所述發酵培養基中培養14小時時補加所述酶解液，使發酵培養基中的葡萄糖含量為20g/L，繼續培養16小時結束發酵；在本發明的另一個實施方式中，在所述發酵培養基中培養24小時結束發酵。

由上述方法制備的促進牡丹生長并拮抗病原菌的菌劑及該菌劑的用途也屬于本發明的保護范圍。

本發明所提供的促進牡丹生長并拮抗病原菌的菌劑的用途，所述用途為下述C1）-C3）中任一種：

C1）促進牡丹生長和拮抗病原菌；

C2）促進牡丹生長；