[發明專利]一種高效液相色譜法測定長春胺有關物質的方法

無效

• 申請號: 201410116092.X
• 申請日: 2014-03-27
• 公開（公告）號: CN103869018A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 彭學東;張梅;趙金召;祁亞楠
• 申請（專利權）人: 張家港威勝生物醫藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種用HPLC法測定長春胺有關物質的方法，尤其是合成長春胺過程的中間體的測定方法，屬于藥物分析領域。

背景技術

長春胺是由夾竹桃植物蔓長春花(Vinca?major)、小蔓長春花(V.minor)、直立長春花(V.erecta)、異性蔓長春花(V.dilormis)分離的生物堿。長春胺為腦血管擴張藥,能維持或恢復腦血管的生理擴張，增加缺血區的正常腦血流量，提高腦對血氧的利用率，改善缺氧腦組織代謝。

長春胺國際市場需求量很大，目前已可半合成，其合成路線有很多，關于其原料藥及中間體有關物質控制的報道國內幾乎沒有，中國藥典尚無與其相關的質量控制標準，建立一種高效，快速，準確，專屬性強的高效液相色譜方法對其有關物質進行檢測和控制具有非常重要的意義。

發明內容

本發明的目的在于建立一種HPLC方法測定長春胺有關物質的方法。可用于長春胺原料藥及長春胺在合成和儲藏過程中可能產生的有關物質的檢測和質量控制。

本發明提供了一種高效液相色譜法測定長春胺有關物質的方法，選用十八烷基鍵合硅膠色譜柱，流動相為乙腈-0.1M碳酸銨溶液（7:3）,檢測器選用紫外檢測器，檢測波長為260nm。

本發明具體的實施方案中，所述流動相選自0.1M碳酸銨和0.2M乙酸銨溶液，優選0.1M碳酸銨溶液。

本發明具體的實施方案中，乙腈與0.1M碳酸銨溶液比例為80%~55%：20%~45%，優選乙腈比例為70%。

本發明具體的實施方案中，流動相流速根據色譜柱長短進行選擇，可選用0.8?ml/min~1.5?ml/min。

本發明具體的實施方案中，檢測波長優選260nm。

本發明提供的一種高效液相色譜法測定長春胺有關物質的方法，其具體的實施步驟包括：

取長春胺成品25mg，流動相超聲溶解，配制成長春胺濃度為1mg/ml的供試品溶液。

取長春胺標準品25mg，流動相超聲溶解，配制成長春胺濃度為1mg/ml的標準品溶液，取上述標準品溶液適量，流動相稀釋500倍，配制成濃度為標準品溶液0.2%濃度的溶液，作為有關物質定量測定的對照品溶液。

取0.1ml合成長春胺的中間體Ⅰ的終反應液，流動相稀釋至10ml，作為中間體對照溶液1。

取0.1ml合成長春胺的中間體Ⅱ的終反應液，流動相稀釋至10ml,作為中間體對照溶液2。

分別準確吸取供試品溶液，對照品溶液，中間體對照溶液1和中間體對照溶液(2)5μl，注入液相色譜儀，長春胺主峰與相有關物質雜質峰之間的分離度應大于1.5，符合中國藥典對分離度的要求，按主峰長春胺峰計算，理論塔板數為11549，大于5000，主峰與其他對照溶液峰的對稱因子分別為0.98和0.96，均符合中國藥典的標準。

本發明方法適用于長春胺測定的可以是長春胺純品，粗品，原料藥等以長春胺為主成分的產品。本發明的測定方法還適用于合成過程中的中間體Ⅰ、中間體Ⅱ及其他在合成過程中產生的未知中間產物的測定和質量控制。

附圖說明

圖1為長春胺供試品溶液色譜圖。

圖2為對照品溶液色譜圖。

圖3為長春胺合成過程中中間體Ⅰ和中間體Ⅱ的色譜圖。

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具體實施方式

實施例1

長春胺純品，購自歐洲sigma公司，純度為99.83%。高效液相色譜儀選用美國Agilent1260型號儀器，檢測器為DAD檢測器，色譜柱為thermo?C18，4.6×250mm，5μm，檢測波長260nm，進樣量：5μl(G1315D自動進樣器)，流速1ml/min,柱溫：35℃，流動相：乙腈-0.1M碳酸銨溶液（7:3）等度洗脫。

實驗步驟：

取長春胺純品25mg，流動相超聲溶解，配制成長春胺濃度為1mg/ml的供試品溶液。

取長春胺標準品25mg，流動相超聲溶解，配制成長春胺濃度為1mg/ml的標準品溶液，取上述標準品溶液適量，流動相稀釋500倍，配制成濃度為標準品溶液0.2%濃度的溶液，作為有關物質定量測定的對照品溶液。

分別取供試品溶液和對照品溶液，按照本發明色譜條件，分別注入液相色譜儀，按照本發明分析條件分析并記錄色譜圖。