[發明專利]一種快速檢測中藥綜合毒性的生物測試方法

有效

• 申請號: 201410115374.8
• 申請日: 2014-03-25
• 公開（公告）號: CN103868916B
• 公開（公告）日: 2017-04-12
• 發明（設計）人: 趙軍寧;鄢良春
• 申請（專利權）人: 四川省中醫藥科學院
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙)51222
• 代理人: 李高峽,張娟

1.一種快速檢測中藥綜合毒性的生物測試方法，其特征在于：包括如下步驟：

（1）制備測試用菌液：取發光細菌凍干粉，用氯離子濃度為0.1-1.0mol/L的溶液復蘇，得測試用菌液；

（2）檢測：取待檢中藥樣品，用測試用菌液檢測，確定濃度-效應動力曲線以及發光強度抑制率為50%的濃度。

2.根據權利要求1所述的測試方法，其特征在于：步驟（1）中，所述發光細菌是費氏弧菌、明亮發光桿菌、青海弧菌及其它非致病發光細菌。

3.根據權利要求1所述的測試方法，其特征在于：步驟（1）中，所述制備測試用菌液的方法是：取型號為CS234的費氏弧菌凍干粉1支，加入0.2-1.0ml的氯離子濃度為0.51mol/L的溶液，即得測試用菌液。

4.根據權利要求1所述的測試方法，其特征在于：步驟（1）中，所述含氯離子的溶液的pH為5～9。

5.根據權利要求1所述的測試方法，其特征在于：步驟（2）所述檢測的方法如下：

a、預測試：取待檢中藥樣品，用水稀釋成5個濃度的待檢液，體積百分比分別是：100%、25%、6.25%、1.5625%、0.39%，以氯離子濃度為0.1-1.0mol/L的溶液為標準液，在所述待檢液和標準液中加入測試用菌液，菌液加入量為待檢液或標準液體積的1/25～1/15，放置5～30min，檢測發光強度，計算5個濃度的發光度抑制率；

b、確定檢測濃度的上限及下限：根據步驟a的結果，以抑制率為90～100%的任一濃度為上限，若樣品原液的抑制率未達到90%，則以樣品原液為上限；以抑制率為0～10%的任一濃度為下限；

c、測試：在步驟b確定的濃度上限和下限之間增配6～9個濃度的待檢液，以氯離子濃度為0.1-1.0mol/L的溶液為標準液，在所述待檢液和標準液中加入測試用菌液，菌液加入量為待檢液或標準液體積的1/25～1/15，放置5～30min，檢測發光強度，制作濃度-效應動力曲線，計算抑制率為50%的濃度。

6.根據權利要求5所述的測試方法，其特征在于：步驟a和步驟c中，所述待檢液中加有含氯離子的溶液，氯離子的濃度為0.1-1.0mol/L；所述標準液中氯離子濃度為0.51mol/L。

7.根據權利要求5所述的測試方法，其特征在于：步驟a和步驟c中，所述待檢液和氯化鈉溶液的pH為5～9。

8.根據權利要求5所述的測試方法，其特征在于：步驟a和步驟c中，所述菌液加入量為待檢液或標準液體積的1/20。

9.根據權利要求5所述的測試方法，其特征在于：步驟a和步驟c中，所述放置時間為15min。

10.根據權利要求1～9任意一項所述的測試方法，其特征在于：檢測發光強度采用生物毒性測試儀或其他具有發光強度檢測功能的儀器。