[發明專利]一株膠紅酵母菌株ZZR-1#及該菌株生產角質酶的方法

有效

• 申請號: 201410112223.7
• 申請日: 2014-03-25
• 公開（公告）號: CN104109638A
• 公開（公告）日: 2014-10-22
• 發明（設計）人: 張學俊;張文坤;冉琴琴;張萌萌;李銀環;蘇曉蘭
• 申請（專利權）人: 河南恒瑞源實業有限公司
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12N9/18;C12R1/645
• 代理公司: 洛陽公信知識產權事務所(普通合伙) 41120
• 代理人: 時國珍

1.一株膠紅酵母菌ZZR-1#，其特征在于：分類命名為膠紅酵母（Rhodotorula?mucilaginosa），已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?No.?8890。

2.利用權利要求1所述的膠紅酵母菌ZZR-1#生產角質酶的方法，其特征在于：其具體制備步驟為：

步驟一、斜面培養：將儲備于低溫冰箱中的膠紅酵母菌ZZR-1#菌種接種到斜面種子培養基上，在26-28℃下培養48h，得到斜面種子培養基培養的菌種，備用；

所述的斜面種子培養基為，每1000?ml培養基，加入馬鈴薯100克、胰蛋白胨?1.0-5.0g、乳糖1.0-5.0g和瓊脂?17.0g，余量為水；

步驟二、搖瓶種子培養：取2-3接種環斜面種子培養基培養的菌種，接種于裝有100mL搖瓶種子培養基的250mL錐形瓶中，并于27-29℃、160r/min搖床培養36h-48h，得到搖瓶種子培養菌種；

所述的搖瓶種子培養基配方為：每1000?ml培養基，加入乳糖1.5-15.0g、酵母粉0.5-5.0g、氯化鈉?0.5-2.0g和硫酸鎂?0.5-2.0g，余量為水，pH?6.3-6.8；

步驟三、擴大培養：將搖瓶種子培養菌種接種到裝有200ml一級擴大培養基的500ml錐形瓶里，接種量為一級擴大培養基體積的3-5％；置于27-29℃恒溫搖床中、160r/min環境下培養，搖床培養36h-48h，得到擴大培養菌種；

所述擴大培養基的配方為：每1000?ml培養基，加入豆餅粉0.5-5.0g、乳糖1.5-15.0g、酵母粉0.5-5.0g、氯化鈉?0.5-2.0g和磷酸二氫鉀0.075-0.100g、硫酸亞鐵?0.01g，余量為水，pH?6.3-6.8；

步驟四、再次擴大培養：將擴大培養菌種接種到裝有1.5L再次擴大培養基的5L錐形瓶里，接種量為再次擴大培養基體積的5-7％；然后置于27-29℃恒溫搖床中、160r/min環境下培養48h-72h，得到再次擴大培養菌種；

所述的再次擴大培養基配方為：每1000?ml培養基，加入玉米淀粉0.5-5.0g、豆餅粉0.5-5.0g、乳糖1.5-15.0g、酵母粉3-8g、氯化鈉?0.5-2.0g和硫酸鎂?0.5-2.0g、磷酸二氫鉀0.075-0.100g，硫酸亞鐵?0.01-0.02g，余量為水，pH?6.3-6.8；

步驟五、發酵罐培養：將再次擴大培養菌種接種于發酵培養基中，接種量為發酵培養基體積的3-5%，培養溫度27-29℃，攪拌速度150-165r/min，每分鐘通入發酵液的空氣體積與發酵液的體積比為1：5-1：9，pH值為6.5-6.6，發酵時間5-6?天；

所述的發酵罐培養配方為：每1000?ml培養基，加入玉米漿3.0-5.0g、豆餅粉0.5-5.0g、乳糖1.5-15.0g、酵母粉0.5-5.0g、氯化鈉?0.5-2.0g和硫酸鎂?0.5-2.0g、磷酸二氫鉀0.075-0.100g，硫酸亞鐵?0.01-0.02g，余量為水，pH?6.3-6.8；

步驟六、角質酶的分離：將發酵所得發酵液用12層紗布過濾，濾液于4℃下以5500rpm的轉速離心30min，上清即為粗酶液；對所得粗酶液進行濃縮后，提純，得到角質酶。