[發明專利]一種液基薄層細胞涂片檢查抗酸桿菌的方法

無效

• 申請號: 201410111666.4
• 申請日: 2014-03-25
• 公開（公告）號: CN103822815A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 胡望福;周小玫;詹國蒼;羅智勇;劉高焦;陳學峰;段水蓮;劉子東;肖人鴻;彭江琴
• 申請（專利權）人: 吉安協和醫院
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/30;G01N21/84
• 代理公司: 南昌洪達專利事務所 36111
• 代理人: 劉凌峰

技術領域

本發明涉及一種檢查抗酸桿菌的方法，尤其涉及一種液基薄層細胞涂片檢查抗酸桿菌的方法。

背景技術

結核病是嚴重危害人類健康的慢性傳染病。在結核病控制工作中，結核病細菌學檢查對于發現傳染源，確定診斷和制定治療方案具有重要意義，是診斷結核病的金標準。結核病細菌學檢查目前有涂片抗酸染色鏡檢和分離培養。涂片抗酸染色鏡檢是世界范圍內結核病細菌學檢查中使用廣泛的技術，此法設備簡便、操作容易，但檢出陽性率較低（約5%-10%），且近年呈下降趨勢。分離培養較涂片抗酸染色鏡檢法敏感性、特異性強，但設備要求高，操作繁雜，培養時間長，需要2個月才報告結果，不能滿足臨床診斷的需要。為突破涂片抗酸染色鏡檢陽性率低，分離培養時間長，出結果慢的局限，國內外一直在探討簡便實用陽性率高的檢查方法，但未見成功的報道。我們創新發明的液基薄層細胞涂片檢查抗酸桿菌的新技術，該技術較涂片抗酸染色檢查抗酸桿菌陽性率提高數十倍，又無假陽性，可以作為診斷結核病的金標準，有推廣應用的前景。

發明內容

本發明的目的在于提供一種液基薄層細胞涂片檢查抗酸桿菌的方法，該方法比現有的涂片檢查抗酸桿菌陽性率提高數十倍，可以盡早發現結核病傳染源，早診斷、早治療，減輕病人負擔，控制結核病的蔓延。

本發明是這樣來實現的，一種液基薄層細胞涂片檢查抗酸桿菌的方法，其特征在于方法步驟如下：

（1）收集標本，采受試者痰液（胸腹水、腦脊液、尿液、支氣管沖洗液，穿刺液等）2-5ml；

（2）配制處理液，液基薄層細胞涂片查抗酸桿菌標本前處理液自行配制；

（3）離心，上述標本加入到自制的痰前處理液中，振蕩5-30分鐘（視標本而定），離心機2000轉/分，離心2-10分鐘后取出；

（4）制片，用吸管吸取經振蕩離心后的標本前處理液試管底部的標本1-2毫升，入制片倉中，制片倉放入制片機中，6-10分鐘后，制片機制好后取出干燥；

（5）抗酸染色，涂片干燥后，加熱固定，滴加石碳酸復紅染液，保持染色5-10分鐘，流水輕緩沖洗，沖去染色液，滴加脫色劑，脫色1-15分鐘，流水輕緩沖洗，沖去脫色液，滴加亞甲藍復染液，染色30秒，流水輕緩沖洗，待玻片干燥后鏡檢；

（6）顯微鏡檢查，用10x目鏡雙目顯微鏡鏡檢（物鏡用100x油鏡）讀片；

（7）鏡檢結果報告。

抗酸桿菌陰性（-）：連續觀察300個不同視野，未發現抗酸桿菌。?

抗酸桿菌陽性（報告抗酸桿菌數）：1-8條/300視野。?

抗酸桿菌陽性（1+）：3-9條/100視野，連續觀察300個視野。?

抗酸桿菌陽性（2+）：1-9條/10視野，連續觀察100個不同視野。

抗酸桿菌陽性（3+）：1-9條/每視野。?

抗酸桿菌陽性（4+）：＞10條/每視野。

本發明的優點是：比現有技術的痰厚涂片檢查抗酸桿菌陽性率提高數十倍，可以盡早發現結核病傳染源，早診斷、早治療，減輕病人負擔，控制結核病的蔓延。

具體實施方式

以下結合本發明的實施例作進一步詳細描述，但本實施例并不用于限制本發明，凡是采用本發明的相似結構及其相似變化，均應列入本發明的保護范圍。

具體實施例一：

（1）收集標本。采受試者痰液2-5ml；

（2）配制處理液。液基薄層細胞涂片查抗酸桿菌痰前處理液自行配制；

（3）離心。上述痰液加入到自制的痰前處理液中，振蕩20-30分鐘，離心機2000轉/分，離心2-10分鐘后取出；

（4）制片。用吸管吸取經振蕩離心后的痰前處理液試管底部的痰液1-2毫升，入制片倉中，制片倉放入制片機中，6-10分鐘制片機制好后取出干燥；

（5）抗酸染色，涂片干燥后，加熱固定，滴加石碳酸復紅染液，保持染色5-10分鐘，流水輕緩沖洗，沖去染色液，滴加脫色劑，脫色1-15分鐘，流水輕緩沖洗，沖去脫色液，滴加亞甲藍復染液，染色30秒，流水輕緩沖洗，待玻片干燥后鏡檢；

（6）顯微鏡檢查，用10x目鏡雙目顯微鏡鏡檢（物鏡用100x油鏡）讀片；

（7）鏡檢結果報告。

具體實施例二：

（1）收集標本。采受試者腦脊液2-5ml；

（2）配制處理液。液基薄層細胞涂片查抗酸桿菌痰前處理液自行配制；

（3）離心。上述腦脊液痰液加入到自制的痰前處理液中，振蕩5-10分鐘，離心機2000轉/分，離心2-10分鐘后取出；