[發明專利]α?淀粉酶的檢測試劑和檢測方法

有效

• 申請號: 201410110657.3
• 申請日: 2014-03-24
• 公開（公告）號: CN103898193B
• 公開（公告）日: 2017-03-29
• 發明（設計）人: 王青;王柯敏;王輝;羊小海;翦立新
• 申請（專利權）人: 湖南大學
• 主分類號: C12Q1/40
• 分類號: C12Q1/40;C12Q1/34
• 代理公司: 湖南兆弘專利事務所(普通合伙)43008
• 代理人: 趙洪

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種檢測試劑和檢測方法，具體涉及一種α-淀粉酶的檢測試劑和利用便攜式血糖儀或其它葡萄糖檢測儀快速定量檢測α-淀粉酶的方法。

背景技術

α-淀粉酶（α-1,4-D-葡萄糖-葡萄糖苷水解酶）能切斷淀粉、糖原、寡聚或多聚糖分子內的α-1,4?葡萄糖苷鍵，產生麥芽糖、低聚糖和葡萄糖等。α-淀粉酶由唾液腺和胰腺內具有分泌功能的上皮細胞合成。流行性腮腺炎，特別是急性胰腺炎時，血和尿中的α-淀粉酶濃度顯著增高。一些急腹癥，如急性闌尾炎、腸梗阻、胰腺癌、潰瘍病穿孔等均可引起血清α-淀粉酶升高，因此α-淀粉酶的檢測具有重要的臨床意義。

傳統的用于α-淀粉酶測定的方法主要有：（1）以天然淀粉為底物的測定方法。以天然淀粉為底物時，由于天然淀粉分子結構組成的不確定性及酶解產物的不均一性，使酶促反應不能按化學式量進行計算。應用不同來源、廠家、批號的淀粉作為底物時，測得結果差別較大，方法不易標準化。目前除碘-淀粉法外，這類方法已被淘汰。（2）使用結構確定的人工合成底物進行α-淀粉酶測定的酶偶聯分析方法。這類方法可以改進酶反應的化學計量關系，在加入不同工具酶后進行多步水解過程，通過測定水解終產物的吸光度值來計算α-淀粉酶的濃度。這些底物有小分子寡聚糖（含3～7個葡萄糖單位）和對-硝基苯酚-糖苷等。其中麥芽戊糖和麥芽四糖是常用的的反應底物，試劑穩定，水解產物確定，化學計量關系明確。

但是，這些傳統的檢測α-淀粉酶的方法需要大型的昂貴儀器，如大型全自動生化儀，通過測定水解終產物的吸光度值來計算α-淀粉酶的濃度。由于大型全自動生化儀設備價格高，操作復雜，操作人員需要相關專業知識和培訓，并且該儀器使用配套條件要求高，需要專業人員定期保養，因此基層醫療機構或家庭個人沒有條件購買和使用。如果我們能夠利用低成本的、操作簡單的便攜式檢測儀器，例如已經商業化的便攜式血糖儀，在無需專業技術人員協助情況下就可以方便個人在家中對α-淀粉酶進行快速地檢測，這對于低收入人群或不發達國家中的人們來說將具有重大意義。因此，發展一種快速的，低成本的，簡單易行的α-淀粉酶檢測方法將具有非常重要意義。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種可快速定量檢測α-淀粉酶的檢測試劑，還提供一種操作簡便、快速、所用儀器可便攜、靈敏度高、選擇性好、且無需專業培訓即可快速對α-淀粉酶進行檢測的α-淀粉酶的檢測方法。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為一種α-淀粉酶的檢測試劑，所述檢測試劑包括以下濃度的組分：

麥芽戊糖???????????????????????10mmol/L～40mmol/L，

α-葡萄糖苷酶???????????????1000U/L～5000U/L，

氯化鈣??????????????????????????10mmol/L～30mmol/L，和

緩沖液??????????????????????????1mmol/L～50mmol/L。

上述麥芽戊糖、α-葡萄糖苷酶和氯化鈣的濃度均指在緩沖液中的終濃度。

上述的檢測試劑中，優選的，所述緩沖液的pH值為7.0～7.5。

上述的檢測試劑中，優選的，所述緩沖液包括磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀緩沖液或Tris-鹽酸緩沖液。

作為一個總的技術構思，本發明還提供一種α-淀粉酶的檢測方法，包括以下步驟：將α-淀粉酶溶液加入上述的α-淀粉酶的檢測試劑中進行催化反應，反應完成后，利用便攜式葡萄糖檢測儀對所得反應產物進行檢測，記錄檢測儀的讀數，計算α-淀粉酶溶液的濃度。

上述的檢測方法中，優選的，所述便攜式葡萄糖檢測儀包括便攜式血糖儀。

上述的檢測方法中，優選的，所述催化反應的時間為5min～60min。

上述的檢測方法中，優選的，所述檢測方法中的所有操作過程均控制在25℃～45℃條件下進行，更優選的，所述檢測方法中的所有操作過程均控制在37℃條件下進行。

上述的檢測方法中，優選的，所述α-淀粉酶溶液中α-淀粉酶的濃度為20U·L^-1～1000U·L^-1。

上述的檢測方法中，優選的，所述α-淀粉酶溶液的溶劑為緩沖液，所述緩沖液與所述α-淀粉酶的檢測試劑中采用的緩沖液相同。

本發明中檢測α-淀粉酶的原理為：