[發明專利]半胱氨酸功能化的透明質酸結合物及其合成方法以及在可注射原位形成的水凝膠中的應用

有效

• 申請號: 201410110610.7
• 申請日: 2014-03-24
• 公開（公告）號: CN103910886A
• 公開（公告）日: 2014-07-09
• 發明（設計）人: 張歆;胡碧煌
• 申請（專利權）人: 海南大學
• 主分類號: C08G81/00
• 分類號: C08G81/00;C08B37/08;A61L27/20;A61L27/52
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 鄭瑩

1.一種半胱氨酸功能化的透明質酸結合物，其結構式為：

n為0～30，x為200～3000。

2.權利要求1所述一種半胱氨酸功能化的透明質酸結合物的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)取結構式為的化合物1為原料，在丙酮加熱回流條件下，發生環化反應l生成結構式為的化合物2；

2)將化合物2與二碳酸二叔丁酯反應，生成氨基被叔丁氧羰基(Boc)保護的結構式為的化合物3；

3)將化合物3與N-羥基琥珀酰亞胺在二環己基碳二亞胺條件下，發生酯化反應，生成結構式為的化合物4；

4)將化合物4與胱胺在堿性條件下，發生酰化反應，生成結構式為的化合物5；

5)將化合物5的二硫鍵還原，生成結構式為的化合物6；

6)將化合物6與聚乙二醇類化合物在堿性條件下，發生環氧乙

烷的開環反應，生成結構式為的化合物7；

7)將化合物7與透明質酸在四丁基氫氧化銨條件下，發生環氧乙烷開環反應，生成結構式為的化合物8；

8)將化合物8脫去叔丁氧羰基(Boc)保護基，再于減壓濃縮條件下，發生開環反應，生成結構式為的化合物9，即半胱氨酸功能化的透明質酸結合物；其中，n為0～30，x為200～3000。

3.根據權利要求1所述的一種半胱氨酸功能化的透明質酸結合物的制備方法，其特征在于：

其制備方法具體包括以下步驟：

1)化合物2的制備：取化合物1半胱氨酸鹽酸鹽，加入干燥丙酮回流2～10h，減壓濃縮至不多于總反應液體積三分之一的體積，放入冰箱不少于0.5h，析出結晶，過濾取濾渣，得到化合物2，其中丙酮與化合物1的體積質量比不小于20；

2)化合物3的制備：把化合物2用乙腈溶解，加入二碳酸二叔丁酯，混勻后逐滴加入N，N-二異丙基乙胺，15℃～37℃攪拌反應24～72h，減壓濃縮溶劑，再加入乙醚或環己烷繼續減壓濃縮，再加入乙醚或環己烷，用硅藻土過濾，濾液依次用0.01～0.1mol／L?HCl溶液、H₂O、飽和NaCl萃取，干燥，減壓濃縮，得到化合物3，其中二碳酸二叔丁酯、N，N-二異丙基乙胺的物質的量獨立為化合物2的1.1～3倍；

3)化合物4的制備：將化合物3和N-羥基琥珀酰亞胺用四氫呋喃溶解，0～4℃冰浴，往其中滴加N，N′-二環己基碳二亞胺的四氫呋喃溶液，混合均勻后反應3～12h，至反應液用薄層色譜檢測反應完全，放入0～4℃冰箱靜置0.5～12h，過濾取濾液，經減壓濃縮溶劑，異丙醇重結晶，得到化合物4，其中N-羥基琥珀酰亞胺、N，N′-二環己基碳二亞胺的物質的量獨立為化合物2的1.05～1.5倍；

4)化合物5的制備：用水溶解摩爾量相當于化合物4摩爾量0.525～0.6倍的胱胺二鹽酸鹽，用水溶解摩爾量相當于胱胺二鹽酸鹽摩爾量4倍的碳酸鈉，滴加在胱胺二鹽酸鹽水溶液中，冰浴，攪拌均勻；用四氫呋喃溶解化合物4，滴加入上述反應液中，15℃～37℃反應6～24h，直至薄層色譜檢測反應完全；減壓濃縮溶劑，調節pH為3～7，再用乙酸乙酯或二氯甲烷萃取，有機相用0.01～0.1mol/LHCl溶液、H₂O、飽和NaCl萃取，干燥，減壓濃縮，得到化合物5；

5)化合物6的制備：將化合物5的乙醇溶液中，再加入0.5～1.0倍體積的水，冰浴攪拌均勻，再緩慢加入硼氫化鈉，待不再有氣泡冒出，置于15～37℃攪拌反應4～12h，至薄層色譜檢測反應完全，再加入相對反應液體積2～4倍的水終止反應；調節pH為3～5，二氯甲烷萃取，水洗，通氬氣，封口干燥，過濾，加壓濃縮得到化合物6，其中，硼氫化鈉的物質的量為化合物5的5～10倍；

6)化合物7的制備：往聚乙二醇類化合物的乙腈溶液中加入碳酸氫鈉的水溶液，15～37℃攪拌均勻，通氬氣，再往其中滴加化合物6的乙腈溶液，滴加完后通氬氣，反應液中乙腈：水的體積比為(2∶3)～(3∶2)，封口，15～37℃攪拌反應6～24h，直至薄層色譜檢測反應完全、Ellamn試劑顯色不顯黃色為止，減壓濃縮溶劑，用二氯甲烷或乙酸乙酯萃取，有機相用水洗后干燥，過濾取濾液，減壓濃縮得到化合物7，其中，碳酸氫鈉、化合物6的物質的量分別為聚乙二醇類化合物的1～2倍、1.1～1.5倍；

7)化合物8的制備：稱取其分子量為10萬～100萬的透明質酸，加入四丁基氫氧化銨水溶液，得到透明質酸反應液，其中透明質酸反應液質量濃度為5％～20％，分1～4次加入化合物7的乙腈溶液，15～37℃攪拌反應6～72h，用0.01～1mol／L?HCl溶液中和反應液，透析，凍干，飽和氯化鈉乙醇溶液洗滌，干燥，得到化合物8，其中，四丁基氫氧化銨、化合物7的物質的量分別為透明質酸伯醇基的0.5～2倍、0.5～10倍，乙腈體積為四丁基氫氧化銨水溶液的0.5～2.5倍；

8)化合物9的制備：將化合物8加入體積百分數為80～100％的三氟乙酸水溶液中，使化合物8的濃度為5～20g／L，15～37℃攪拌反應3～6h，減壓濃縮，加入體積濃度為45～55％的乙醇溶液，30～40℃減壓濃縮3～10次，用Ellman試劑檢測顯黃色后，用飽和氯化鈉乙醇溶液析出產物，洗滌干凈，干燥，得到產物化合物9，即半胱氨酸功能化的透明質酸結合物。