[發明專利]豬傳染性胃腸炎滅活疫苗的制備方法及產品

無效

• 申請號: 201410109345.0
• 申請日: 2014-03-21
• 公開（公告）號: CN103877571A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 何玉友;馮建民;王全杰;吉有紅;嚴成;黎淵;王國輝;馮會;柳志光;吳艷麗;田麗華;王石;楊澤彬;廉維;劉斌;楊鍵
• 申請（專利權）人: 吉林正業生物制品股份有限公司
• 主分類號: A61K39/225
• 分類號: A61K39/225;A61P31/14
• 代理公司: 北京康思博達知識產權代理事務所(普通合伙) 11426
• 代理人: 余光軍

技術領域

本發明涉及一種豬傳染性胃腸炎滅活疫苗的生產方法，尤其涉及一種利用WAVE波浪生物反應器生產豬傳染性胃腸炎滅活疫苗的方法，屬于豬傳染性胃腸炎滅活疫苗的生產領域。

背景技術

豬傳染性胃腸炎(Transmissible?gastroenteritis,TGE)是由冠狀病毒科豬傳染性胃腸炎病毒(Transmissible?gastroenteritis?virus，TGEV)引起的以仔豬嘔吐、嚴重腹瀉和高致死率為特征的消化道傳染病。該病是中國及世界各養豬國家仔豬早期死亡的重要疫病之一。新生仔豬感染豬傳染性胃腸炎病毒后感染20h內患胃腸炎，在1～4d死亡1周齡仔豬感染后死亡率可達100%，TGEV傳播可以通過消化道和呼吸道與受感染個體或攜帶疾病豬糞便、乳汁、嘔吐物、呼吸及鼻腔分泌物直接接觸發生，雖然豬為主要易感動物，有報道狗自然感染TGEV，也會出現腹瀉、嘔吐、虛脫和體溫異常等臨床癥狀，新生仔豬接觸受感染狗糞便則會引發TGE。

近年來，TGE在中國國內流行形勢嚴峻，已成為嚴重危害養豬業重要疫病之一。疫苗接種是預防此病有效措施。目前在中國廣泛應用的疫苗為豬傳染性胃腸炎滅活疫苗，疫苗的生產采用的是傳統的轉瓶工藝，該工藝在疫苗行業已經使用了數十年，其操作技術相對簡單和成熟。但是每個轉瓶均是獨立的細胞培養單元，每瓶細胞的質量、病毒產量和滴度都不同，導致疫苗批次間差異大，而且操作勞動強度大，生產效率低，隱性污染引起的高內毒素等缺點，已經越來越不適應當前疫苗大規模生產的要求。

WAVE波浪生物反應器是采用拋棄型生產技術進行細胞培養的一種新型反應器。其工作方式是，細胞接種于可拋棄的細胞培養袋內，接種細胞的培養袋固定在托盤上以一定的方式搖動，精密控制的搖動保證了培養體系的有效混合和傳氧效率。采用WAVE波浪生物反應器，主要優點有1）免除生物反應器清洗、消毒及其相關認證。2）封閉培養系統，無需固定的管道，簡化細胞培養廠房，縮短反應器安裝和生產產品轉換時間。3）細胞培養袋Cellbag放在特殊設計的搖動平臺上，平臺的搖動在培養液中產生波浪提供培養物混合和氧氣傳遞，產生一個適于細胞生長的完美環境。

采用WAVE波浪生物反應器生產豬傳染性胃腸炎滅活疫苗時，所加入微載體的含量、細胞接種密度、細胞培養袋的搖動參數等生產條件對于豬傳染性胃腸炎滅活疫苗的生產效率以及免疫保護效力的高低等有非常顯著的影響，在生產實踐中需要對這些條件進行優化才能有效提高豬傳染性胃腸炎滅活疫苗的生產效率以及免疫保護效力。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用WAVE波浪生物反應器生產豬傳染性胃腸炎滅活疫苗的方法，該方法對微載體的含量、細胞接種密度、細胞培養條件等參數進行了優化，有效提升了豬傳染性胃腸炎滅活疫苗的生產效率以及免疫保護效力。

本發明的上述目的是通過以下技術方案來實現的：

一種利用WAVE波浪生物反應器生產豬傳染性胃腸炎滅活疫苗的方法，包括：（1）細胞的培養：將ST細胞接種到細胞培養袋中的微載體上，加入細胞培養基，搖動細胞培養袋培養細胞；（2）病毒液的增殖：沉降微載體，洗滌培養的細胞，接種豬傳染性胃腸炎病毒毒種，加入病毒增殖培養基培養細胞，收獲病毒液；（3）將病毒液滅活，乳化，得到豬傳染性胃腸炎滅活疫苗；其中，所述的搖動條件為擺動角度6°、擺動速度為14rpm。

采用WAVE波浪生物反應器培養ST細胞時，搖動培養參數對于細胞在微載體上的吸附以及細胞生長有非常顯著的影響，為了篩選到最適宜的搖動培養參數以最大限度的促進細胞生長，本發明對搖動培養時的擺動角度以及擺動速度等參數進行了優化考察，觀察不同的培養條件對于細胞的生長所帶來的影響。通過實驗發現，在對于細胞培養袋中的細胞進行搖動培養時，擺動角度以及擺動速度對于細胞的生長有非常顯著的影響；本發明最終發現，當搖動培養時的培養條件為擺動角度6°、擺動速度為14rpm能夠最為顯著的促進細胞的生長，該培養條件下的細胞生長速度顯著高于其它的培養條件。