[發(fā)明專利]一種用于篩查禽流感和人流感病毒易感人群的檢測工具

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410108148.7
• 申請日: 2014-03-21
• 公開（公告）號: CN103884834A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發(fā)明（設計）人: 李錚;秦棪楠;鐘耀剛;于漢杰;魚靜敏;陳琳;朱光
• 申請（專利權(quán)）人: 西北大學
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 西安智邦專利商標代理有限公司 61211
• 代理人: 胡樂

1.一種用于篩查禽流感和人流感病毒易感人群的凝集素測試芯片，采用環(huán)氧化片基，其特征在于：該凝集素測試芯片針對唾液樣本，在所述環(huán)氧化片基上僅點樣固定有MAL-Ⅱ和SNA這兩種凝集素。

2.權(quán)利要求1所述凝集素測試芯片的制備及處理方法，用于生成檢測唾液樣本中糖蛋白糖鏈末端唾液酸α2-3和α2-6糖鏈結(jié)構(gòu)的反應體系，包括以下步驟：

1）取環(huán)氧化片基備用；

2）取凝集素配制濃度均為1mg/mL的兩種點樣液，有效成分分別為MAL-Ⅱ和SNA；

3）將配制的點樣液加到384孔板內(nèi)；再用點樣儀在環(huán)氧化片基上點制8區(qū)或12區(qū)的陣列；

4）將點制好的芯片在濕度為55%-65%的環(huán)境中孵育過夜；

5）對孵育好的芯片在37℃的真空干燥器中抽真空，使凝集素固定于芯片上；

6）將凝集素芯片放置在干燥器中,避光保存；即得到權(quán)利要求1所述的凝集素測試芯片；

7）配制終濃度2%BSA、500mmol/L甘氨酸和0.05%吐溫20與磷酸鹽緩沖液混勻，PH7.4，然后用0.2μm的濾膜過濾，得到封閉液，將步驟6）保存的凝集素芯片置于封閉液中1小時；

8）將封閉后的凝集素芯片依次用吐溫20磷酸鹽緩沖液和磷酸鹽緩沖液分別清洗1次，每次5分鐘，再經(jīng)甩干后備用；

9）對甩干后的凝集素芯片加入150-200μL的孵育緩沖液，作為與待測樣本的反應環(huán)境；

所述磷酸鹽緩沖液以1L總量計，組分為：NaCl?8.0g，KCl?0.2g，KH₂PO₄?0.2g，Na₂HPO₄·12H₂O?2.9g；

所述吐溫20磷酸鹽緩沖液是還含有體積分數(shù)0.05-0.5%吐溫20的所述磷酸鹽緩沖液；

所述孵育緩沖液是還含有質(zhì)量分數(shù)1%牛血清白蛋白和質(zhì)量分數(shù)10-20%羥胺的所述吐溫20磷酸鹽緩沖液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的凝集素測試芯片的制備及處理方法，其特征在于：步驟4）將點制好的芯片在濕度為60%的環(huán)境中孵育12小時。

4.一種用于篩查禽流感和人流感病毒易感人群的凝集素芯片試劑盒，其特征在于：包括權(quán)利要求1所述的凝集素測試芯片、封閉液、清洗液和孵育緩沖液，其中

封閉液是配制終濃度2%BSA、500mmol/L甘氨酸和0.05%吐溫20與磷酸鹽緩沖液混勻，PH7.4，然后用0.2μm的濾膜過濾所得；

清洗液為吐溫20磷酸鹽緩沖液和磷酸鹽緩沖液這兩種溶液的組合，所述磷酸鹽緩沖液以1L總量計，組分為：NaCl?8.0g，KCl?0.2g，KH₂PO₄?0.2g，Na₂HPO₄·12H₂O?2.9g；所述吐溫20磷酸鹽緩沖液是還含有體積分數(shù)0.05-0.5%吐溫20的所述磷酸鹽緩沖液；

孵育緩沖液是還含有質(zhì)量分數(shù)1%牛血清白蛋白和質(zhì)量分數(shù)10-20%羥胺的所述吐溫20磷酸鹽緩沖液。