[發(fā)明專利]分泌抗香蕉束頂病毒單抗雜交瘤細(xì)胞株及其單抗應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410107809.4
• 申請(qǐng)日: 2014-03-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103911351A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-07-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳建祥;周雪平;宋西嬌;洪健
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/20
• 分類號(hào): C12N5/20;C07K16/08;G01N33/577;G01N33/569
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 張法高

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種分泌抗香蕉束頂病毒單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株及其單抗的應(yīng)用。?

背景技術(shù)

香蕉束頂病的病原為香蕉束頂病毒（Banana?bunchy?top?virus，BBTV）。1889年該病首先在斐濟(jì)被發(fā)現(xiàn)，之后在澳大利亞、印度、巴基斯坦、印度尼西亞、中國(guó)大陸和臺(tái)灣、加蓬、太平洋諸島嶼，埃及、剛果、菲律賓、越南等其他國(guó)家和地區(qū)陸續(xù)報(bào)道。20世紀(jì)，香蕉束頂病成為香蕉上的重要的毀滅性病害之一，該病威脅著亞洲、非洲和南太平洋地區(qū)共約占世界1/4香蕉產(chǎn)區(qū)的生產(chǎn)。在中國(guó)，早在1900年就有關(guān)于BBTV的記載，到了20世紀(jì)50年代和90年代，香蕉束頂病在福建、廣東、廣西、云南和海南等主要香蕉產(chǎn)區(qū)流行，造成重大經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重影響了當(dāng)時(shí)香蕉生產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。雖然通過(guò)挖除病株防治蚜蟲(chóng)以及栽培脫毒蕉苗等人工手段可很大程度上防治香蕉束頂病，但對(duì)管理不當(dāng)或無(wú)人管理的蕉園，該病仍具有很大的危害。香蕉束頂病毒屬矮縮病毒科、香蕉束頂病毒屬，病毒粒體位18-20nm的等徑粒體。國(guó)內(nèi)外研究表明，BBTV不能通過(guò)汁液摩擦或土壤傳播，植株根部自然交接和菟絲子也均不能傳播，僅由香蕉交脈蚜以持久方式傳播。BBTV的短距離傳播靠香蕉交脈蚜傳染，而遠(yuǎn)距離傳播則靠帶病的繁殖材料。目前已報(bào)道的寄主有8種，均屬芭蕉科，包括香蕉、大蕉、粉芭蕉、蕉麻、長(zhǎng)梗蕉、尖苞片蕉、班克氏芭蕉、象腿蕉。香蕉束頂病在香蕉整個(gè)生長(zhǎng)季節(jié)均可發(fā)生。苗期染病植株主要呈矮縮狀，新抽葉片變小變窄，束狀叢生，葉脈上首先出現(xiàn)深綠色點(diǎn)線狀的“青筋”；中苗期染病植株新抽嫩葉初呈黃白色，后逐漸變暗至暗色條紋，并向主脈擴(kuò)展；孕穗后期染病，新抽嫩葉失綠、易脆，抽穗停滯；初穗期染病，病株呈花葉狀，穗軸不再下彎，香蕉停止生長(zhǎng)；抽穗后期染病，香蕉同樣停滯生長(zhǎng)，病株根系生長(zhǎng)不良或爛根，假莖基部微紫紅色，解剖假莖可見(jiàn)褐色條紋，外層鞘皮隨葉子干枯變褐或枯焦，少數(shù)晚期受害的則果形變細(xì)、果味變淡，失去商品價(jià)值。為了掌握香蕉束頂病毒發(fā)病狀況，強(qiáng)化我國(guó)香蕉束頂病早期監(jiān)測(cè)和預(yù)警，科學(xué)指導(dǎo)防控，急需建立檢測(cè)芭蕉科中BBTV的高通量的檢測(cè)方法，而目前沒(méi)有這種高通量的檢測(cè)方法，僅用低效率的電鏡觀察、PCR方法、核酸電泳等方法進(jìn)行小樣本檢測(cè)。本發(fā)明以提純的香蕉束頂病毒為抗原通過(guò)雜交瘤技術(shù)制備了1株分泌抗BBTV的特異性單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞22E3，以制備的單抗為核心可建立檢測(cè)BBTV的高通量的血清學(xué)方法及其試劑盒，從而為我國(guó)香蕉束頂病早期監(jiān)測(cè)和預(yù)警，科學(xué)指導(dǎo)防控提供物質(zhì)和技術(shù)支持。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種分泌抗香蕉束頂病毒單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株及其單抗的應(yīng)用。?

分泌抗香蕉束頂病毒單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株22E3，它能分泌抗香蕉束頂病毒的特異性單克隆抗體,?雜交瘤細(xì)胞株22E3保藏與中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為CGMCC?No.8780。?

抗香蕉束頂病毒的單克隆抗體腹水間接ELISA效價(jià)達(dá)10^-7，抗體類型及亞類為IgG1、kappa鏈，該單克隆抗體能與香蕉束頂病毒的衣殼蛋白有特異性免疫結(jié)合反應(yīng)。?

抗香蕉束頂病毒的單克隆抗體僅與香蕉束頂病毒有特異性免疫反應(yīng)，而與香蕉線條病毒、香蕉苞片嵌紋病毒、柑橘衰退病毒、柑橘碎葉病毒、蕪菁花葉病毒、番茄花葉病毒、煙草花葉病毒、馬鈴薯X病毒、馬鈴薯Y病毒、黃瓜花葉病毒均不發(fā)生免疫反應(yīng)。?

抗香蕉束頂病毒單克隆抗體在抗香蕉束頂病毒檢測(cè)上的應(yīng)用是以單克隆抗體為核心建立的各種免疫學(xué)檢測(cè)方法和免疫學(xué)試劑盒。?

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有的有益效果：1）提供的雜交瘤細(xì)胞株22E3分泌抗香蕉束頂病毒特異性單克隆抗體，以該單抗為核心建立的dot-ELISA和ACP-ELISA等免疫學(xué)方法及用這些方法建立的試劑盒能高度特異、準(zhǔn)確、靈敏的檢測(cè)香蕉束頂病毒；2）利用本發(fā)明所制備的單克隆抗體檢測(cè)香蕉束頂病毒，不需要昂貴的電子顯微鏡、PCR儀等設(shè)備；3）利用本發(fā)明所制備的單克隆抗體，可有效地用于香蕉中香蕉束頂病毒的檢測(cè)。?

附圖說(shuō)明

圖1是dot-ELISA方法檢測(cè)香蕉中BBTV的靈敏度分析；?

圖2?是dot-ELISA方法檢測(cè)芭蕉科田間樣品中BBTV的結(jié)果；

生物保藏

雜交瘤細(xì)胞株22E3保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，郵編：100101，保藏日期為：2014年1月22日，保藏號(hào)為CGMCC?No.8780。?

具體實(shí)施方式