[發(fā)明專(zhuān)利]用于測(cè)定藍(lán)細(xì)菌毒素的存在或不存在的方法和試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410107802.2
• 申請(qǐng)日: 2009-10-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103940895A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: S.A.奧爾勒
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 沃特世科技公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N27/62
• 分類(lèi)號(hào): G01N27/62
• 代理公司: 中國(guó)專(zhuān)利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 權(quán)陸軍

1.一種測(cè)定樣品中環(huán)肽和生物堿藍(lán)細(xì)菌毒素的存在或不存在的方法，其包括步驟：

在包含弱陽(yáng)離子交換樹(shù)脂和弱陰離子交換樹(shù)脂的固相提取設(shè)備上制備潛在包括環(huán)肽和生物堿藍(lán)細(xì)菌毒素的水樣品，以形成保留或濃縮的毒素樣品，

使所述保留或濃縮的毒素樣品在流動(dòng)相中洗脫或重構(gòu)，以形成樣品提取物；

將所述樣品提取物置于在41.37-103.4?MPa（6,000-15,000磅/英寸²）的壓力下用具有1-3微米平均粒度的顆粒裝填的層析柱頭上，以形成潛在包括環(huán)肽或生物堿藍(lán)細(xì)菌毒素的保留樣品，如果所述樣品提取物包含此種藍(lán)細(xì)菌毒素的話(huà)；

在有機(jī)溶劑的梯度下從所述層析柱中洗脫來(lái)自潛在包括環(huán)肽或生物堿藍(lán)細(xì)菌毒素的所述保留樣品的化合物，以形成包括環(huán)肽或生物堿藍(lán)細(xì)菌毒素的至少一種洗脫的化合物，如果所述樣品提取物包含此種藍(lán)細(xì)菌毒素的話(huà)；和

將潛在包括環(huán)肽或生物堿藍(lán)細(xì)菌毒素的所述洗脫的化合物置于質(zhì)譜儀中以形成質(zhì)譜，并且由所述質(zhì)譜測(cè)定所述藍(lán)細(xì)菌毒素的存在或不存在。

2.權(quán)利要求1的方法，其中所述質(zhì)譜儀形成藍(lán)細(xì)菌毒素的一種或多種片段，并且所述片段的所述光譜用于鑒定且測(cè)定所述藍(lán)細(xì)菌毒素的存在或不存在。

3.權(quán)利要求1或2的方法，其中將所述樣品提取物置于層析柱頭上，洗脫且將所述藍(lán)細(xì)菌毒素置于質(zhì)譜儀中的所述步驟在小于15分鐘的時(shí)間段內(nèi)執(zhí)行。

4.權(quán)利要求1的方法，其中所述粒子選自橋接乙基雜化物和高強(qiáng)度硅石。

5.權(quán)利要求1的方法，其中所述粒子具有小于2微米的平均直徑。

6.權(quán)利要求1的方法，其中所述樣品提取物通過(guò)在所述弱陰離子交換樹(shù)脂上提取生物堿藍(lán)細(xì)菌毒素形成。

7.權(quán)利要求1的方法，其中所述樣品提取物通過(guò)在所述弱陽(yáng)離子交換樹(shù)脂上提取環(huán)肽藍(lán)細(xì)菌毒素形成。

8.權(quán)利要求1的方法，其中所述固相提取設(shè)備具有包括聚合物二乙烯基苯-N-乙烯吡咯烷酮共聚物的粒子。

9.一種用于就環(huán)肽和生物堿藍(lán)細(xì)菌毒素的存在或不存在執(zhí)行樣品分析的試劑盒，其包括：

用于校準(zhǔn)且促進(jìn)通過(guò)質(zhì)譜法鑒定一種或多種環(huán)肽和生物堿藍(lán)細(xì)菌毒素的標(biāo)準(zhǔn)，

用于形成樣品提取物的樣品制備設(shè)備，其中所述設(shè)備包含弱陽(yáng)離子交換樹(shù)脂和弱陰離子交換樹(shù)脂，

柱，其用于使所述樣品提取物的化合物分離和在應(yīng)用梯度后釋放所述藍(lán)細(xì)菌毒素，如果存在的話(huà)，從而使得所述藍(lán)細(xì)菌毒素釋放至質(zhì)譜儀用于鑒定。

10.權(quán)利要求9的試劑盒，其中所述柱用具有1-3微米的平均粒度的顆粒裝填。

11.權(quán)利要求10的試劑盒，其中所述粒子具有選自橋接乙基雜化物和高強(qiáng)度硅石的層析表面。

12.權(quán)利要求11的試劑盒，其中所述柱具有41.37-103.4?MPa（6,000-15,000磅/英寸²）的操作壓力。