[發明專利]分泌抗大麥黃矮病毒GAV株系單抗雜交瘤細胞株及其單抗應用

有效

• 申請號: 201410107741.X
• 申請日: 2014-03-21
• 公開（公告）號: CN103911349A
• 公開（公告）日: 2014-07-09
• 發明（設計）人: 吳建祥;周雪平;李娜
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/10;G01N33/577;G01N33/569
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種分泌抗大麥黃矮病毒GAV株系單克隆抗體雜交瘤細胞株及其單抗的應用。?

背景技術

小麥黃矮病是由大麥黃矮病毒（Barley?yellow?dwarf?virus?,BYDV）引起的，該病害在全世界均有分布，它的寄主廣泛，可寄生150多種單子葉植物，特別是侵染大麥、小麥、燕麥、水稻等多種禾谷類作物。1950年在美國加利福尼亞州的大麥上首先發現，是世界上危害最嚴重、流行最廣泛的植物病毒之一。我國于1960年在陜西、甘肅的小麥上發現，是小麥最重要的病毒病害，被稱為小麥的“黃色瘟疫”，“小麥癌癥”。目前主要分布在西北、華北、東北、華中、西南及華東等冬麥區、春麥區及冬春麥混種區，除危害小麥外，還能侵染大麥、莜麥、粟、糜子、玉米、水稻和禾本科雜草。受害小麥一般減產40%左右，嚴重的可達70%以上。我國20世紀60年代以來，曾于1966、1968、1970、1973、1978、1980和1987年大流行。在陜西、甘肅、寧夏、山西和內蒙古等省、自治區造成小麥嚴重減產。這類病毒除了在經濟上的重要性外，它們的基因表達機制、進化與傳播介體和寄主的作用機制，幾十年來一直被研究者所關注。?

小麥黃矮病的癥狀因寄主種類、品系、生長期及生理條件、病毒株系、接種劑量和環境條件等因素的不同而有差異。寄主植物受黃矮病毒侵染后，苗期感病植株生長緩慢、分蘗減少、扎根淺、易拔起。病葉自葉尖褪綠變黃，葉片厚硬。病株越冬期間易被凍死，未凍死的返青拔節后新生葉片繼續發病。病株矮化、不抽穗或抽的穗很小。拔節孕穗期感病的植株較矮，根系發育不良。典型癥狀是新葉從葉尖開始發黃，隨后出現與葉脈平行，但不受葉脈限制的黃綠相間的條紋，沿葉緣向葉莖部擴展蔓延，黃化部分約占全葉的1/3-1/2。病葉質地光滑，后期逐漸黃枯，而下部葉片仍為綠色。病株能抽穗，但籽粒秕瘦。穂期感病的植株一般只旗葉發黃，呈鮮黃色，植株矮化不明顯，能抽穗，粒重降低。大麥幼苗期感病后嚴重矮縮，分蘗增多，葉片變硬發脆，葉尖開始變黃，呈鮮艷的金黃色或橙色，有光澤，不抽穗或抽的穂很小，籽粒很少，且不飽滿。拔節期感病，節間縮短，植株顯著矮化，分蘗增多，葉片呈金黃色。抽穗后感病，一般只旗葉呈金黃色，矮化較輕，能抽穂，籽粒秕瘦。?

大麥黃矮病毒是一類+ssRNA病毒。BYDV為對稱球型病毒，外殼為二十面體（T=3），無包膜。由蚜蟲以循佪型持久傳播，病毒粒體在蚜蟲體內不增殖，不能通過摩擦接觸接種。不同種的病毒蚜傳特性不同，即總是每一種病毒對應一種或幾種蚜蟲傳播介體。病毒在植物體內僅限于韌皮部組織，并且在寄主體內濃度很低。?

世界上引起麥類作物黃矮病的病毒隸屬于黃癥病毒科的黃癥病毒屬，目前已知的有病毒PAV、MAV、SGV、RPV、RMV?以及我國特有的GAV和GPV。其中PAV、MAV是黃癥病毒屬的正式成員，禾谷黃矮病毒RPV被分在馬鈴薯卷葉病毒屬，SGV、GAV、GPV、和RMV還未正式命名。?

大麥黃矮病毒的侵染循環在冬麥區、冬春麥混種區是有差異的。冬麥區如陜、甘、豫、魯、冀、皖、蘇等省在5月中下旬，傳毒介體麥蚜從小麥寄主上遷出，在越夏寄主上取食、繁殖和傳播病毒。越夏寄主包括玉米、高粱、糜子、粟（谷子）、水稻等作物以及自生麥苗、鵝觀草、野燕麥、雀麥、畫眉草、白羊草、馬唐、蟋蟀草、虎尾草等禾本科雜草。秋季小麥出苗后，麥蚜又遷回麥地，特別是田邊的小麥上取食、繁殖和傳播病毒，并以有翅成蚜、無翅成蚜和若蚜在麥田基部越冬，有些地區也產卵越冬。冬前感病的小麥是第二年早春的發病中心。返青后，在拔節期出現一次發病高峰。發病中心的病毒隨著麥蚜的遷移擴散逐漸蔓延，到抽穗期出現第二次發病高峰。?

冬、春麥混種區如甘肅河西走廊一帶，5月中旬，冬小麥上的麥蚜逐漸產生有翅蚜，向春小麥、大麥、高粱、糜子及禾本科雜草上遷移。晚熟春麥、糜子和自生麥苗是蚜蟲和大麥黃矮病毒的主要越夏場所。9月下旬，冬小麥出苗后，麥蚜又遷回麥田，在冬小麥上產卵越冬，小麥黃矮病毒也隨之傳到冬小麥麥苗上，在冬小麥根部和分蘗節里越冬。第二年3月中旬，越冬蚜卵開始孵化，4月中旬產生有翅蚜，遷移擴散，不斷地傳播病毒。?