[發(fā)明專利]一種羊棘球蚴亞單位疫苗及其制備方法和應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410107227.6
• 申請日: 2014-03-21
• 公開（公告）號: CN103861093A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發(fā)明（設計）人: 李陽春;曹政;郭建華;李春燕;何丹
• 申請（專利權）人: 重慶澳龍生物制品有限公司
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61K48/00;A61P33/10;C12N15/70;C12P21/02;C07K14/435;C07K1/34
• 代理公司: 北京匯澤知識產權代理有限公司 11228
• 代理人: 朱振德

技術領域

本發(fā)明屬于免疫學領域，具體涉及一種羊棘球蚴亞單位疫苗，以及該疫苗的制備方法和應用。

背景技術

棘球蚴病(Echinococosis?granulosis)又稱包蟲病(Hydatidosis)，是一種人獸共患的流行性寄生蟲病，是廣大牧區(qū)所面臨的最嚴重的絳蟲病之一，嚴重影響了畜牧業(yè)發(fā)展和人類健康。包蟲病是由細粒棘球絳蟲(Echinococcus?granulosus)的中期幼蟲棘球蚴(Echinococcus)寄生在哺乳動物臟器所引發(fā)。而犬類是主要的終末宿主，在感染細粒棘球蚴后，幼蟲在其小腸內發(fā)育成熟并產生蟲卵。蟲卵可隨糞便排放及犬的活動污染自身皮毛、牧草、水源等區(qū)域。當人及其他哺乳動物接觸到蟲卵后，蟲卵會在小腸內發(fā)育稱棘球蚴，且該幼蟲可進入血管隨血液循環(huán)而進行轉移，最終多寄生于肝、肺等臟器，并形成包囊并引發(fā)疾病。目前我國畜牧養(yǎng)殖產業(yè)中受到包蟲病危害的家畜有11種之多，其主要危害表現為畜產品發(fā)育受阻、減產、及臟器廢棄等，其中以綿陽及生豬感染情況尤為嚴重。在高發(fā)區(qū)，綿陽感染率高于60％，其中肺臟廢棄率10－28％、肝臟廢棄率8－25％、減產量平均2kg/只。以2009年報道計算，我國畜牧業(yè)年直接經濟損失達10億元，且呈現逐年遞增狀態(tài)。對家畜包蟲病疫情的防控不徹底，不僅造成畜牧業(yè)的大量經濟損失，同時也在危害著人類的健康。我國每年人感染包蟲病的病例高于50萬例，通過手術治療的病例也超過3000例。以我國新疆地區(qū)為代表，人患包蟲病的感染率高達31％，手術后復發(fā)率高達33％，更有患者為治療包蟲病反復手術而傾家蕩產。在治愈的患者中，仍然有38％的治愈著無法恢復勞動能力。

疫苗是防控傳染病最有效的手段，但至今仍沒有一款用于預防棘球蚴病的產品。因此，急需一種用于預防棘球蚴病的疫苗。

發(fā)明內容

有鑒于此，本發(fā)明的目的之一在于提供一種羊棘球蚴亞單位疫苗，本發(fā)明的目的之二在于提供羊棘球蚴亞單位疫苗的制備方法；本發(fā)明的目的之三在于提供羊棘球蚴亞單位疫苗的應用。

為實現上述發(fā)明目的，提供如下技術方案：

1、一種羊棘球蚴亞單位疫苗，所述疫苗的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

優(yōu)選的，所述疫苗的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

更優(yōu)選的，所述疫苗為無佐劑注射劑型疫苗或佐劑注射型疫苗。

最優(yōu)選的，所述佐劑注射劑型疫苗含3mg/3mL的佐劑和含2500μg/3mL的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示的蛋白，所述佐劑為氫氧化鋁或磷酸鋁。

所述無佐劑注射劑型疫苗含有濃度為2500μg/3mL氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示的蛋白。

2、所述疫苗的制備方法，包括如下步驟：構建含SEQ?ID?NO.1所示核苷酸序列的重組原核表達載體，然后將重組原核表達載體轉化原核表達菌株，經發(fā)酵培養(yǎng)后純化，得羊棘球蚴亞單位疫苗。

優(yōu)選的，所述原核表達菌株為大腸桿菌BL?21菌株。

優(yōu)選的，所述發(fā)酵培養(yǎng)為將原核表達菌株在37℃條件下震蕩培養(yǎng)至對數期，然后將培養(yǎng)液全部接種于種子罐，再在37℃條件下培養(yǎng)至OD值為1.0-1.5時，將培養(yǎng)液接種于二級種子罐培養(yǎng)，最后轉移至發(fā)酵罐中進行發(fā)酵，當菌體OD值達到40時，添加IPTG至終濃度為1mM誘導4-5小時。

優(yōu)選的，所述純化為將誘導后的培養(yǎng)液離心收集沉淀，經洗液I重懸后進行破碎，破碎后離心收集沉淀，再用洗液I重懸，并添加曲拉通至體積分數為1%，攪拌2-3h，然后用孔徑為0.2μm的中空纖維柱超濾去除可溶性雜質，再進行濃縮，并加入與洗液I體積相等的洗液II，繼續(xù)攪拌2-3h，繼續(xù)用孔徑為0.2μm中空纖維柱超濾，濃縮后收集沉淀，將沉淀用變性液溶解，37℃攪拌過夜，再用10kD截留分子量的中空纖維柱超濾，至懸液體積減少一半時，緩慢補加等體積的復性液，繼續(xù)進行超濾濃縮，將濃縮液離心去除雜質，繼續(xù)用0.45μm的中空纖維柱超濾，向濾出液中添加相當于濾出液2倍體積的變性液，然后超濾并收集濾出液，再用孔徑為0.22μm的中空纖維柱超濾，收集濾出液，并向濾出液中添加相當于濾出液2倍體積的變性液后繼續(xù)超濾收集濾出液，接著用10kD中空纖維柱超濾，超濾至蛋白含量大于30mg/mL。

3、所述疫苗在制備預防羊棘球蚴感染的疫苗中的應用。