[發明專利]一種核酸擴增反應試劑的凍干保護劑及凍干方法

在審

• 申請號: 201410106550.1
• 申請日: 2014-03-20
• 公開（公告）號: CN103911367A
• 公開（公告）日: 2014-07-09
• 發明（設計）人: 吳文學;劉旭;徐威
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種用于凍干保護的組合物，為如下1）或2）：

1）所述組合物由海藻糖、甘露醇、牛血清白蛋白和水組成，所述海藻糖、甘露醇、牛血清白蛋白和所述水的配比為4.0—25g:1—7g:1.0—7g：49-50ml；

2）所述組合物由海藻糖、甘露醇、牛血清白蛋白、吐溫、Tris-HCl和水組成，所述海藻糖、所述甘露醇、所述牛血清白蛋白、所述吐溫、所述Tris-HCl和所述水的配比為4.0—25g:1—7g:1.0—7g：0.1—0.25ml：2.5×10^-3—5.0×10^-3mol：49-50ml。

2.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于：

1）所述的組合物中，所述海藻糖、甘露醇、牛血清白蛋白和水的配比為5.26—25g:1.32—6.25g:1.32—6.25g:49-50ml；

2）所述的組合物中，所述海藻糖、所述甘露醇、所述牛血清白蛋白、所述吐溫、所述Tris-HCl和所述水的配比為4.0—25g:1.32—6.25g:1.32—6.25g：0.1—0.25ml：2.5×10^-3—5.0×10^-3mol：49-50ml。

3.根據權利要求1或2所述的組合物，其特征在于：

所述甘露糖和所述牛血清白蛋白為等質量比。

4.一種制備權利要求1-3中任一所述組合物的方法，包括如下步驟：將權利要求1-3中任一所述組合物的各物質按照對應的質量比混勻，即得到用于凍干保護的組合物。

5.權利要求1-3中任一所述用于凍干保護的組合物在凍干核酸擴增反應試劑中的應用。

6.一種凍干核酸擴增反應試劑的方法，包括如下步驟：

1）將權利要求1-3中任一所述用于凍干保護的組合物和核酸擴增反應試劑混勻，干燥，得到干燥產物；

2）將所述干燥產物凍干，即得到核酸擴增反應試劑凍干制品。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：

步驟1）中，所述組合物和所述核酸擴增反應試劑的體積比為2.81-10.33:8.75-22.1；

所述核酸擴增反應試劑為環介導等溫擴增反應試劑、反轉錄環介導等溫擴增反應試劑、滾環擴增反應試劑、依賴于核酸序列恒溫擴增反應試劑、聚合酶鏈式反應試劑、反轉錄PCR反應試劑或實時熒光定量PCR反應試劑。

8.根據權利要求6或7所述的方法，其特征在于：

步驟1）中，所述干燥采用冷凍真空干燥；

步驟2）中，所述凍干的條件為：預凍階段經過40min—1h，隔板溫度下降到-42℃—-40℃、預凍時低溫保持時間為3h—4h；主干燥階段，首先用10min—30min抽真空至0.1mbar、再用2h—4h將擱板溫度升至-25℃—-15℃，然后保持4h—6h，此階段共6h10min—10h30min；終末干燥階段，首先用10min—30min抽真空至0.01mbar，再用2h—3h將擱板溫度升至15℃—25℃,然后保持3h—5h，此階段共5h10min—8h30min。

9.根據權利要求6-8中任一所述的方法，其特征在于：

若所述核酸擴增反應試劑中含有吐溫和Tris-HCl，則所述組合物為1）所述組合物；

若所述核酸擴增反應試劑中不含有吐溫和Tris-HCl，則所述組合物為2）所述組合物。