[發明專利]用于檢測禽流感病毒N9亞型的RT-PCR引物對、試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 201410106522.X
• 申請日: 2014-03-21
• 公開（公告）號: CN104017902A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發明（設計）人: 孫明;陳西釗;喬明明;馮向輝;王傳彬;才學鵬
• 申請（專利權）人: 北京世紀元亨動物防疫技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 吳泳歷;曹治麗

1.一種用于檢測禽流感病毒N9亞型的引物對，其特征在于，一條引物包含如SEQ?ID?NO：3所示的核苷酸序列，另一條引物包含如SEQ?ID?NO：6所示核苷酸序列。

2.包含權利要求1所述引物對的組合物。

3.一種用于檢測禽流感病毒N9亞型的試劑盒，其特征在于，包含權利要求2所述的組合物。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，還包含RT-PCR反應液、酶混合液，所述的RT-PCR反應液由權利要求1所述的引物對、反應緩沖液和dNTPs混合在一起；所述酶混合液由RNA酶抑制劑、反轉錄酶和Taq?DNA聚合酶按3:2:10混合在一起。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其還包含一種X液，所述的X液為一對引物，所述引物對可對陽性對照的RNA進行擴增，擴增的片段長度與禽流感病毒N9亞型所檢測的目的基因長度相同。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，其中X液的一條引物包含如SEQ?ID?NO：7所示的核苷酸序列，另一條引物包含如SEQ?ID?NO：8所示核苷酸序列。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其還包含陽性對照、陰性對照、RNA提取試劑和電泳檢測試劑，所述陽性對照為新城疫耐熱保護劑活疫苗（LaSota株），經滅活后得到；所述陰性對照為SPF雞胚尿囊液，經滅活后得到。

8.權利要求1所述的引物對在制備檢測禽流感病毒N9亞型的試劑中的用途。

9.一種檢測禽流感病毒N9亞型的方法，包括使用權利要求1所述的引物對。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）使用權利要求1所述的引物對形成RT-PCR反應液，并與酶混合液形成擴增反應體系；

（2）將步驟（1）的擴增反應體系在PCR擴增儀上進行PCR反應。

（3）將擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳，觀察檢查結果。