[發(fā)明專利]一種枳實藥材指紋圖譜、其建立方法及用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410106425.0
• 申請日: 2014-03-21
• 公開（公告）號: CN103837621A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 喬善義;孫磊;劉曉晴
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進委員會專利商標事務(wù)所 11038
• 代理人: 劉海羅

1.一種枳實藥材HPLC指紋圖譜的建立方法，包括下述步驟：

（1）枳實供試品的制備，和

（2）高效液相色譜分析方法。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建立方法，其中，所述步驟（1）包括：

1）稱取枳實藥材，加入5－15倍量（ml/g）的蒸餾水回流提取1－5次，每次1－5h；

2）將提取物過濾，合并濾液；將濾液濃縮，得到濃縮液；

3）向濃縮液中加入無水乙醇，至乙醇含量為50%－90%，均勻攪拌，靜置1－24小時，離心，得到沉淀；

4）用50%－90%乙醇洗滌沉淀，離心，合并上清，濃縮除醇，將得到的提取液冷凍干燥，得到供試品；

優(yōu)選地，還包括：

5）精密稱取供試品，用50%－90%的甲醇定容，以微孔濾膜過濾，得到枳實供試品溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的建立方法，其特征在于如下的A－H項中的任意一項或者多項：

A.步驟1）中，加入8－12倍量（例如8、9、10、11、12）的蒸餾水；

B.步驟1）中，回流提取2－4次（例如2、3或4次）；

C.步驟1）中，回流提取2－4小時（例如2、3或4小時）；

D.步驟3）中，至乙醇含量為60%－80%（例如65%－75%、60%、65%、70%、75%或80%）；

E.步驟3）中，靜置時間為5－15小時（例如8－12小時、8、9、10、11或12小時）；

F.步驟4）中，乙醇濃度為60%－80%（例如65%－75%、60%、65%、70%、75%或80%）；

G.步驟3）和4）中，所述離心獨立地為5－50min，1500－5000rpm（例如為15－30min，2000－300rpm或者25min，2500rpm）；和

H.步驟5）中，甲醇濃度為60%－80%（例如65%－75%、60%、65%、70%、75%或80%）。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建立方法，其中，所述步驟（1）包括：

（1－1）稱取枳實藥材10g，加入100mL蒸餾水回流提取2次，每次2h，過濾，合并兩次濾液；適當濃縮后，加入無水乙醇，至乙醇含量為70%，均勻攪拌，靜置過夜，25min，2500rpm離心，用70%乙醇洗滌沉淀，25min，2500rpm離心，合并上清，濃縮除醇，將得到的提取液冷凍干燥，得到供試品；

優(yōu)選地，還包括：

（1－2）精密稱取枳實中等極性部位樣品0.0200g，用50%甲醇定容至10mL容量瓶中，以0.45μm微孔濾膜過濾，得到枳實供試品溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建立方法，其中，所述步驟（2）包括：

色譜柱填料為Agilent?TC-C₁₈；流動相為含0.1%甲酸的乙腈-水梯度洗脫；梯度洗脫條件為：0min→20min→45min→60min→75min→77min，乙腈3%→20%→20%→30%→80%→100%；流速1.0mL/min；檢測波長為240－310nm；柱溫30℃；進樣量為2－20μL；得到枳實藥材指紋圖譜；

具體地，所述步驟（2）包括：

色譜柱填料為Agilent?TC-C₁₈，規(guī)格為250mm×4.6mm，5μm；流動相為含0.1%甲酸的乙腈-水梯度洗脫；梯度洗脫條件為：0min→20min→45min→60min→75min→77min，乙腈3%→20%→20%→30%→80%→100%；流速1.0mL/min；檢測波長為240-310nm；柱溫30℃；進樣量為20μL；得到枳實藥材指紋圖譜。

6.一種枳實藥材HPLC指紋圖譜，其由權(quán)利要求1至5中任一項所述的建立方法得到。