[發(fā)明專利]一種金屬納米島載體及其制備方法和在免疫檢測(cè)中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410106206.2
• 申請(qǐng)日: 2014-03-20
• 公開（公告）號(hào): CN103837676A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉開;袁超;劉莊;趙信博
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州納達(dá)生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/543
• 分類號(hào): G01N33/543;G01N33/577;G01N33/569
• 代理公司: 南京正聯(lián)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32243
• 代理人: 顧伯興

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及金屬納米島載體及其制備方法和在免疫檢測(cè)中的應(yīng)用的領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

體液免疫檢查在在生物醫(yī)學(xué)研究和疾病早期診斷中具有極為重要的研究?jī)r(jià)值，尤其是實(shí)現(xiàn)對(duì)心腦血管、癌癥等一系列重大疾病的早期檢測(cè)和篩查的關(guān)鍵所在。然而要實(shí)現(xiàn)對(duì)這些體液中較低濃度目標(biāo)分子的分析檢測(cè)，現(xiàn)有的免疫檢測(cè)技術(shù)如放射免疫分析(RIA)、酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)、熒光免疫分析(FIA)、膠體金免疫層析技術(shù)(GICA)還存在著靈敏度低、特異性差等一些問題。尤其是熒光免疫檢測(cè)技術(shù)，雖然理論上能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)單分子水平的標(biāo)記，但由于受到生物分子背熒光、激光散射噪聲等影響而嚴(yán)重降低了其檢測(cè)靈敏度(通常只能到幾十pg數(shù)量級(jí))。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明是要解決現(xiàn)有的熒光免疫分析中背景噪聲大、檢測(cè)靈敏度低的問題，而提供了一種金屬納米島載體及其制備方法和在免疫檢測(cè)中的應(yīng)用。

一種金屬納米島載體，是在載體材料表面形成金屬納米島而得到的，所述的金屬納米島是分立的，所述的金屬納米島的尺寸為10～500nm，所述的金屬納米島之間的間隙為5～200nm。

所述的載體材料為固相材料或懸浮材料。

所述的固相材料為二維平面結(jié)構(gòu)。

所述的固相材料可以為玻片、硅片、石英、聚偏二氟乙烯膜或硝酸纖維素膜。

所述的懸浮材料可以為玻璃微珠、磁珠、聚苯乙烯微球、聚甲基丙烯酸甲酯微球、聚苯乙烯磁性微球或聚甲基丙烯酸甲酯磁性微球。

所述的金屬可以為銀、金-銀合金或銀／金核殼結(jié)構(gòu)。

制備金屬納米島載體的方法，具體是按照以下步驟進(jìn)行的：

一、在載體材料表面吸附一層金納米種子，得到了表面吸附金納米種子的載體材料；

二、配置生長(zhǎng)金屬納米島的反應(yīng)溶液：將還原劑加入到含有金屬離子的溶液中，混合均勻；其中，所述的還原劑與含有的金屬離子的摩爾比為(0.5～2)∶1；所述的金屬離子的溶液的濃度為0.1～5mM；

三、將步驟一中得到的表面吸附一層金納米種子的載體材料放入步驟二中得到的生長(zhǎng)金屬納米島的反應(yīng)溶液中，在18～30℃下振蕩反應(yīng)2～60min；

四、將步驟三中反應(yīng)完成的載體材料取出，用水清洗，干燥，即得到金屬納米島載體。

所述的步驟一中的金納米種子是通過化學(xué)還原法還原Au³⁺得到的，然后利用物理吸附或化學(xué)偶聯(lián)相互作用結(jié)合到載體材料表面的。

所述的步驟一中的載體材料表面吸附的金納米種子的粒徑為1～20nm。

所述的步驟一中的載體材料為固相材料或懸浮材料。

所述的固相材料為二維平面結(jié)構(gòu)。

所述的固相材料可以為玻片、硅片、石英、聚偏二氟乙烯膜或硝酸纖維素膜。

所述的懸浮材料可以為玻璃微珠、磁珠、聚苯乙烯微球、聚甲基丙烯酸甲酯微球、聚苯乙烯磁性微球或聚甲基丙烯酸甲酯磁性微球。

所述的金屬可以為銀、金-銀合金或銀／金核殼結(jié)構(gòu)。

所述的步驟二中的還原劑為NaBH₄，NH₂OH，N₂H₄，CH₂O或C₆H₁₂O₆。

所述的金屬離子溶液為Ag⁺溶液或Au³⁺溶液中的一種或兩種的混合溶液。

所述的步驟二中的還原劑與含有的金屬離子的摩爾比為(0.7～1.5)∶1。

所述的步驟二中的還原劑與含有的金屬離子的摩爾比為1：1。

所述的步驟二中的金屬離子的溶液的濃度為0.3～5mM。

所述的步驟二中的金屬離子的溶液的濃度為0.5～1mM。

所述的步驟四中的水為去離子水。

金屬納米島載體在免疫檢測(cè)中的應(yīng)用，是生物芯片中的捕獲分子捕獲相應(yīng)的物質(zhì)，進(jìn)行熒光掃描和數(shù)據(jù)分析，進(jìn)而完成免疫檢測(cè)，其中使用所述金屬納米島載體作為捕獲分子的修飾載體制成生物芯片。

所述的金屬納米島載體表面修飾腫瘤標(biāo)志物抗體分子制備成生物芯片實(shí)現(xiàn)在腫瘤的早期檢測(cè)中的應(yīng)用。

所述的金屬納米島載體表面修飾自體免疫疾病相關(guān)的抗原、抗體分子制備成生物芯片實(shí)現(xiàn)在自體免疫疾病檢測(cè)中的應(yīng)用。

所述的金屬納米島載體表面修飾乙肝抗體分子、流感病毒DNS序列、結(jié)合病抗體、瘧原蟲抗原(或抗體)、大腸桿菌抗體制備成生物芯片實(shí)現(xiàn)在傳染性疾病的檢測(cè)中的應(yīng)用。