[發明專利]一種陰離子交換層析柱的清洗方法

有效

• 申請號: 201410105823.0
• 申請日: 2014-03-20
• 公開（公告）號: CN104922937B
• 公開（公告）日: 2018-12-04
• 發明（設計）人: 李雪峰;趙國焓;邵海玲
• 申請（專利權）人: 上海天士力藥業有限公司
• 主分類號: B01D15/36
• 分類號: B01D15/36;B01D15/42
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所(普通合伙) 11130
• 代理人: 王為

本發明涉及一種陰離子交換層析柱的清洗方法，所述方法包括如下步驟：步驟1，將不潔的陰離子交換層析柱填料，用水清洗，再用含有NaOH和氯化鈉的水溶液清洗；步驟2，用水洗掉NaOH和氯化鈉，再用異丙醇清洗，再用乙酸清洗；步驟3，用水清洗，再用含有NaOH和氯化鈉的水溶液清洗；步驟4，用平衡緩沖液(pH5.0?8)清洗；根據需要，本發明還包括步驟,5和步驟6的步驟，如下：步驟5，取步驟4得到的清洗液，滴磷酸，觀察有無沉淀產生，如無沉淀，用總有機碳分析儀測定該清洗液，測定結果低于500ppm，則表示清洗合格；步驟6，若有沉淀產生，須用水將步驟4得到清洗液稀釋直至滴加磷酸后無沉淀出現后，將稀釋后的清洗液用總有機碳分析儀測定該清洗液，測定結果乘以稀釋倍數獲得的數據低于500ppm，則表示清洗合格。

技術領域

本發明涉及層析柱的清洗方法，特別涉及一種陰離子交換層析柱的清洗方法。

背景技術

陰離子交換層析法是大量生產目的蛋白的首選方法，與其它方法相比，它的交換載量較大，去除雜多糖和DNA的效果好，且易于放大。在生物制藥領域，陰離子交換層析柱被廣泛應用。在陰離子交換層析柱使用后，填料中會有一些殘留物質，可能會對下次使用造成污染，引入外來污染物，比如會對下一次使用引入內毒素或者將上一次沒有清洗干凈的蛋白引入到下次產物中。

現有清洗方法主要用水浸泡沖洗，或用緩沖溶液，酸，堿等溶液進行浸泡沖洗，但因沒有適當的檢測方法對清洗過的填料進行檢測，對清洗效果無法保障。為保證每次使用后的陰離子交換層析柱清洗干凈，不會對下一次使用造成污染，需要建立規范的陰離子交換層析柱的清洗流程。

本發明經過研究，找到一種簡單易行，適合工業化的清洗方法，即通過七步清洗法，可以保證內毒素和總有機碳清洗合格。本發明通過固定并優化的清洗方法對陰離子交換層析柱進行清洗，使得陰離子交換層析柱清洗效果得到了保障，去除了陰離子交換層析內的內毒素，微生物以及上一次使用殘留的蛋白,確保了總有機碳檢驗合格。

發明內容

本發明提供了一種陰離子交換層析柱的清洗方法，所述清洗是指對使用過或將要使用的不潔填料進行清洗，清洗合格后進行下一次的柱層析。

本發明所述陰離子交換層析柱，其填料為任何一種具有陰離子交換層析功能的填料，優選：Streamline DEAE，Streamline Q.最優選的為Streamline DEAE。

上述填料均可以通過現有技術制備，也可通過購買得到。

本發明提供一種陰離子交換層析柱的清洗方法，包括如下步驟：

步驟1，

將不潔的陰離子交換層析柱填料，用水清洗，再用含有氫氧化鈉和氯化鈉的水溶液清洗；

步驟2，

用水洗掉氫氧化鈉和氯化鈉，再用異丙醇清洗，再用乙酸清洗；

步驟3，

用水清洗，再用含有氫氧化鈉和氯化鈉的水溶液清洗；

步驟4，

用平衡緩沖液(pH5.0-8)清洗。

根據需要，本發明還包括步驟,5和步驟6的步驟，如下：

步驟5，

取步驟4得到的清洗液，滴磷酸，觀察有無沉淀產生，如無沉淀，用總有機碳分析儀測定該清洗液，測定結果低于500ppm，則表示清洗合格。

步驟6，

若有沉淀產生，須用水將清洗液稀釋直至滴加磷酸后無沉淀出現后，將稀釋后的清洗液用總有機碳分析儀測定該清洗液，測定結果乘以稀釋倍數獲得的數據低于500ppm，則表示清洗合格。