[發明專利]一種雙菌株聯合發酵生產L-纈氨酸的方法

有效

• 申請號: 201410105132.0
• 申請日: 2014-03-20
• 公開（公告）號: CN103911419B
• 公開（公告）日: 2017-01-11
• 發明（設計）人: 陳羽中;劉劍;謝暢豐;饒汗生
• 申請（專利權）人: 廣東肇慶星湖生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12P39/00
• 分類號: C12P39/00;C12P13/08;C12R1/19;C12R1/01
• 代理公司: 深圳市君盈知識產權事務所(普通合伙)44315
• 代理人: 楊利娟

1.一種雙菌株聯合發酵生產L-纈氨酸的方法，采用兩株纈氨酸生產菌聯合發酵生產，其特征在于：

兩株纈氨酸生產菌分別是黃色短桿菌和重組大腸桿菌；發酵生產纈氨酸的步驟如下：

（1）將黃色短桿菌接種于種子培養基上，進行種子擴大培養得種子液；

（2）將重組大腸桿菌接種于種子培養基上，進行種子擴大培養得種子液；

（3）將步驟（1）培養的種子液接入滅好菌的發酵培養基中發酵得發酵液，發酵至菌體活力下降，發酵過程補加糖液；

（4）將步驟（2）培養的種子液接入步驟（3）中的發酵液中，并補加營養液，繼續發酵。

2.根據權利要求1所述的雙菌株聯合發酵生產L-纈氨酸的方法，其特征在于，步驟（1）中培養條件是，培養溫度為30±5℃，培養時間16-24小時，控制全過程的氧溶解飽和度大于20%。

3.根據權利要求2所述的雙菌株聯合發酵生產L-纈氨酸的方法，其特征在于，步驟（2）中培養條件是，培養溫度為37±5℃，培養時間12-18小時，控制全過程的氧溶解飽和度大于20%。

4.根據權利要求3所述的雙菌株聯合發酵生產L-纈氨酸的方法，其特征在于，步驟（3）中裝于發酵罐中的種子液接種量為8-15%（m/v），培養條件為，培養溫度為30±2℃，培養時間60-90小時，控制前期的氧溶解飽和度大于20%，中后期的氧溶解飽和度控制在5-10%之間，流加葡萄糖，控制發酵液殘糖在1-1.5%（m/v）之間，流加糖液濃度為50-75%（m/v）。

5.根據權利要求4所述的雙菌株聯合發酵生產L-纈氨酸的方法，其特征在于，步驟（4）中裝于發酵罐中的種子液接種量為25-35%（m/v），培養條件為，培養溫度為37±2℃，培養時間16-24小時，氧溶解飽和度控制5-10%，流加葡萄糖控制發酵液殘糖在1-1.5%（m/v）之間，流加葡萄糖的糖液濃度為50-75%（m/v）。

6.根據權利要求1所述的雙菌株聯合發酵生產L-纈氨酸的方法，其特征在于，步驟（4）進行發酵后采用液相色譜法檢測纈氨酸含量及氨基酸純度。