[發明專利]偽狂犬病病毒變異株雙基因缺失毒株及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 201410105058.2
• 申請日: 2014-03-20
• 公開（公告）號: CN104059889B
• 公開（公告）日: 2017-01-25
• 發明（設計）人: 仇華吉;孫元;羅玉子;李素;李永鋒
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: C12N7/04
• 分類號: C12N7/04;C12N15/63;A61K39/245;A61P31/22;C12R1/93
• 代理公司: 北京思元知識產權代理事務所(普通合伙)11598
• 代理人: 余光軍

1.一株偽狂犬病病毒（pseudorabies virus）TJ株雙基因缺失毒株，其特征在于：缺失了偽狂犬病病毒TJ株的gI和gE基因，所缺失的序列位于偽狂犬病病毒TJ株基因組的第122804-125101位核苷酸，片段大小為2298bp。

2.按照權利要求1所述的偽狂犬病病毒TJ株雙基因缺失毒株，其特征在于：其微生物保藏編號為CGMCC.No.8786；

3.一種構建權利要求1或2所述偽狂犬病病毒TJ株雙基因缺失毒株的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）構建含有偽狂犬病病毒TJ株病毒DNA的左右同源重組臂L和R、EGFP以及Neo基因完整表達盒的轉移載體；

（2）將構建的轉移載體轉染于接種偽狂犬病病毒TJ株后的Vero細胞，經蝕斑篩選與純化獲得過渡病毒；

（3）將過渡病毒基因組酶切處理后與只含有左右同源重組臂L和R的轉移載體共轉染細胞，經蝕斑純化，即得。

4.按照權利要求3所述的方法，其特征在于，所述的轉移載體的構建方法包括：以偽狂犬病病毒TJ株病毒DNA為模板，以SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物對1和SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的引物2為擴增引物，分別擴增左右同源重組臂L和R，將擴增得到的左右同源重組臂L和R克隆于pOK12載體上，獲得轉移載體pOK-LR；擴增含有EGFP、Neo基因的完整表達盒；將含有EGFP、Neo基因的完整表達盒克隆于pOK-LR的L和R片段之間獲得轉移載體pOKLR-EGFP-Neo。

5.按照權利要求3所述的方法，其特征在于：步驟（3）中所述的細胞是Vero細胞。

6.按照權利要求3所述的方法，其特征在于：將過渡病毒基因組用PmeI和PacI進行酶切處理后與轉移載體pOK-LR共轉染細胞。

7.權利要求1或2所述的偽狂犬病病毒TJ株雙基因缺失毒株在制備防治由偽狂犬病病毒所引起的動物傳染病藥物中的應用。

8.按照權利要求7所述的應用，其特征在于，所述的偽狂犬病病毒是偽狂犬病病毒變異株或偽狂犬病病毒經典強毒株。

9.按照權利要求7所述的應用，其特征在于：所述的動物傳染病是動物偽狂犬病。

10.一種預防或治療動物偽狂犬病的疫苗組合物，其特征在于：包括預防或治療上有效量的權利要求1或2所述的偽狂犬病病毒TJ株雙基因缺失毒株以及藥學上可接受的載體或輔料。