[發明專利]針對微小RNA-155種子序列的反義寡核苷酸及應用

在審

• 申請號: 201410103470.0
• 申請日: 2014-03-19
• 公開（公告）號: CN103882020A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 費嘉;駱小闖;豐茂曉;古春明
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞;陳燕嫻

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，特別涉及一種針對微小RNA-155（microRNA，miRNA）種子序列的反義寡核苷酸（tiny?anti-mR-155,t-antimiR-155）及應用。

背景技術

多發性骨髓瘤（multiple?myeloma，MM）是惡性漿細胞克隆性增殖疾病，其發病機制涉及多個方面，包括染色體數量異常、易位、基因突變、表觀遺傳學改變以及在骨髓微環境的改變。多發性骨髓瘤發病呈現多步驟的過程，早期的染色體易位涉及到14號染色體（14q32.33）和4號染色體（4p16.3），結果導致四號染色體上相鄰的MMSET（multiple?myeloma?SET?protein）基因和成纖維細胞生長因子受體3（fibroblast?growth?factor?receptors，FGFR3）基因發生分離。隨著疾病的發展，將再次發生的染色體易位、相關基因的突變（涉及到K-RAS和N-RAS的激活）、復雜核型畸變、TP53和FGFR3基因的突變和CDKN2A和CDKN2C基因的失活。這些遺傳畸變將導致惡性漿細胞的粘附分子表達的改變，必然引起漿細胞和骨髓基質的異常作用，進而引起骨髓微環境（huBMM）中的漿細胞發生多級轉變，這些轉變對腫瘤細胞生長、存活和耐藥性有著重要的影響。隨著研究的深入，發現MM細胞中的miRNAs呈顯著的異常表達，并認為這些異常表達的miRNAs與漿細胞發生的遺傳學畸變，特別是與染色體異常有密切的關聯。

Al?Masri等（Al?Masri?A,Price-Troska?T,Chesi?M,et?al.MicroRNA?expression?analysis?in?multiple?myeloma[abstract].Blood,2005;106:1554）的研究發現在細胞系和病人的骨髓樣本中，惡性的漿細胞miRNA的表達水平出現明顯的差異性，其中高表達的miRNAs包括miR-125b、miR-133a、miR-1和miR-124a。Bakkus?M等（Bakkus?M,Dujardin?S,Van?Riet?I,De?Waele?M.MicroRNA?expression?analysis?in?multiple?myeloma?plasma?cellsand?cell?lines?by?a?quantitative?real-time?PCR?approach[abstract].Blood.2007;110:2472）通過Q-RT-PCR的方法，也檢測出MM病人以及細胞系中一些高表達的miRNAs（let-7a，miR-16，miR-17-5p，miR-19b）。Picchiorri等（Pichiorri?F,Suh?S?S,Ladetto?M,et?al.MicroRNAs?regulate?critical?genes?associated?with?multiple?myeloma?pathogenesis[J].Proceedings?of?the?National?Academy?of?Sciences,2008,105(35):12885-12890）還發現，miRNA-17～92群(miRNA-19a，-19b和-92)和miRNA-106～25群(miRNA-106b-93和-25)在MM樣品中也呈現高表達的現象，miRNA-17～92通過靶向負性調節凋亡前體蛋白Bim的表達，有助于骨髓瘤的形成。Lane?SW等（Lane?S?W,Scadden?D?T,Gilliland?D?G.The?leukemic?stem?cell?niche:current?concepts?and?therapeutic?opportunities[J].Blood,2009,114(6):1150-1157）對MM樣品中異常表達的miRNA進行分析，結果發現miRNA-21，miR-19a，miR-19b表達水平升高，并揭示這些miRNAs參與STAT3和IL-6的抗凋亡途徑。根據染色體易位和周期蛋白D（translocation/cyclin）TC分類，Marta?Lionetti等（Lionetti?M,Biasiolo?M,Agnelli?L,et?al.Identification?of?microRNA?expression?patterns?and?definition?of?a?microRNA/mRNA?regulatory?network?in?distinct?molecular?groups?of?multiple?myeloma[J].Blood,2009,114(25):e20-e26）通過多重分析發現MM在5個TC組中有26個miRNAs具有顯著性表達差異現象，其中值得注意的是在TC5組中有10中miRNAs相比于其它四個TC組有明顯的過表達的趨勢。在這10種過表達的miRNAs中，miR-155在MM中高水平表達首次被發現。目前已知miR-155在B細胞淋巴瘤中是一個重要的生物標志物，有關miR-155在惡性漿細胞病中的功能還沒有文獻報道。由于漿細胞也是來源于B細胞，因此，miR-155在MM中是否具有類似B細胞淋巴瘤中癌基因功能，這引起我們極大的關注。